蛋白酶激活受体2（proteinase-activated receptor2，PAR2）是体内广泛分布的G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)。瞬时受体电位通道香草醛亚型1（Transient receptor potential cation channel vanilloid1，TRPV1）和瞬时受体电位锚蛋白亚型1（transient receptor potential ankyrin1，TRPA1）都是经典的物理和化学刺激感受器，在疼痛传导过程中发挥重要功能。嘌呤受体P2X3（purinergic receptor，P2X3）也与痛觉信息的传递有关。为了研究在疼痛发生发展过程中，激活PAR2及其相关的信号通路与非选择性阳离子通道P2X3、TRPV1和TRPA1之间的关系，本课题通过建立激活PAR2的神经病理性疼痛大鼠模型和PAR2激活背根神经节(dorsal root ganglion，DRG)神经元的体内外实验开展研究。　　第一部分 非选择性阳离子通道在PAR2介导的大鼠神经病理性疼痛中的作用　　给大鼠右侧足底注射SL-NH2激活PAR2建立具有触觉异常性疼痛和热痛觉过敏的行为学改变疼痛动物模型，检测P2X3、TRPV1和TRPA1在DRG神经元的表达和c-Fos在脊髓背角(spinal dorsal horn，SDH)的表达，以及PAR2下游信号通路的关键分子PLCβ3和PKCε的磷酸化水平。SL-NH2注射后0.5h开始进行的行为学检测显示出明显的机械性和热刺激过敏现象的发生，连续检测3d之后，脊髓SDH组织c-Fos蛋白的表达显著上调;注射SL-NH2的一侧DRG组织P2X3、TRPV1和TRPA1表达上调，而且表达P2X3、TRPV1、TRPA1和PAR2的神经元数量显著增加;经PAR2与P2X3、TRPV1、TRPA1双标记检测分析显示，在表达PAR2的神经元中，表达P2X3、TRPV1和TRPA1的神经元数量也显著增加;注射SL-NH2的一侧DRG组织pPLCp3和pPKC￡蛋白的表达显著上调。这些研究结果揭示了神经病理性疼痛行为的发生发展与非选择性阳离子通道P2X3、TRPV1、TRPA1在DRG神经元的表达有关;这些结果为通过干预PAR2与非选择性阳离子通道P2X3、TRPV1、TRPA1作用关系的疼痛治疗策略提供了新的启示和实验依据。　　第二部分 PAR2激活与非选择性阳离子通道表达关系的体外培养研究　　根据以往研究进展及本课题体内实验已有的实验结果，PAR2与P2X3、TRPV1、TRPA1在介导疼痛的过程中具有作用关系，但具体作用机制仍未被阐明，并且体内环境复杂，P2X3、TRPV1、TRPA1受体通道的变化是否单纯由PAR2介导还不可断言，为了消除体内各种环境因素的干扰和影响，因此，本课题采用新生Wistar大鼠体外培养的DRG神经元，仅施加PAR2激动剂单一影响因素，进行相关的研究。激活PAR2的DRG神经元P2X3、TRPV1和TRPA1的表达水平上调出现的同时，表达P2X3、TRPV1、TRPA1和PAR2的神经元数量显著增加;经PAR2与P2X3、TRPV1、TRPA1双标记检测分析显示，在表达PAR2的神经元中，表达P2X3、TRPV1和TRPA1的神经元数量也显著增加;pPLCβ3和pPKCε蛋白的表达显著上调。以上结果表明，PAR2的直接激活可通过PIP2信号通路诱导P2X3、TRPV1和TRPA1的表达，为以这些分子作为靶点的治疗策略提供了证据。