论文部分内容阅读
背景与代谢综合征相关的疾病集可能是导致男性不育的重要原因之一。临床研究表明肥胖引起男性性腺机能减退等疾病发病与血清睾酮水平的下降相关。光甘草定是从光果甘草中分离得到的一种黄酮类多酚提取液。本课题主要研究代谢综合征相关疾病导致睾酮合成能力下降的分子机制及光甘草定对动脉粥样硬化模型兔的睾丸功能是否具有保护作用。目的研究肥胖引起睾酮合成能力降低的机制以及睾丸组织氧化应激和内质网应激对睾丸间质Leydig细胞睾酮合成能力的影响及光甘草定对动脉粥样硬化模型兔睾丸功能保护可能的作用机制。方法新西兰大耳白兔从安徽医科大学动物中心购买,随机分为3组:N组:正常对照组;H组:高脂饮食模型组;G组:光甘草定治疗组。N组正常饲料喂养;H组与G组均用高脂饲料喂养12周;分析血脂(总胆固醇,甘油三脂,低密度脂蛋白)的变化;一侧睾丸组织制成石蜡切片,免疫组织化学法观察Leydig细胞3β-HSD表达情况和F4/80标记的巨噬细胞变化情况;Western blotting检测睾丸组织中睾酮合成的相关蛋白/酶P450 scc和StAR表达情况,SIRT1和抗氧化物MnSOD、GPx4的蛋白表达情况,以及内质网应激分子GRP78表达的变化;MDA和ABTS试剂盒分别检测睾丸组织氧化还原水平和总抗氧化能力。结果1.三组模型兔喂饲12周之后,高脂饮食模型组兔血脂TCH,TG,LDL比正常对照组兔增高(p<0.05);光甘草定治疗组较高脂饮食模型组相比,血清中TG,LDL下降,但差异不显著(p>0.05);2.通过抗3β-HSD单克隆抗体标记的睾丸Leydig细胞免疫组织化学染色结果显示,高脂饮食模型组与正常对照组相比,阳性表达明显变弱;光甘草定治疗组较高脂饮食模型组相比,阳性表达有所增强。特异性抗体F4/80标记的巨噬细胞行免疫组化染色结果显示,高脂饮食模型组较正常对照组巨噬细胞数量增加;光甘草定治疗组和高脂模型组相比,巨噬细胞数量有所减少。3.肥胖相关睾酮合成蛋白/酶降低:在睾丸组织中,与正常对照组比较,P450scc和StAR的表达水平在高脂饮食模型组下降(p<0.05),光甘草定治疗组兔睾丸P450 scc和StAR的表达水平较高脂饮食模型组有所上升(p<0.05)。4.高脂饮食模型组兔及光甘草定治疗组兔睾丸组织抗氧化系统功能降低:与正常对照组相比,SIRT1蛋白表达在高脂模型组及光甘草定治疗组兔睾丸组织中均降低(p<0.05)。而光甘草定治疗组与高脂饮食模型组相比较则SIRT1蛋白表达增加(p<0.05)。在睾丸组织中,较正常对照组相比,GPx4和MnSOD蛋白的表达水平在高脂饮食模型组兔降低(p<0.05),而光甘草定治疗组与高脂饮食模型组相比较则GPx4和MnSOD蛋白表达增加(p<0.05)。5..高脂饮食模型组兔及光甘草定治疗组兔睾丸组织内质网应激标志表达上调:高脂饮食模型组GRP78蛋白的表达水平较正常对照组升高,而光甘草定治疗组较高脂饮食模型组有下降趋势,无统计学意义(p>0.05)。6.MDA试剂盒检测高脂饮食引起组织氧化还原水平结果显示:相对于正常对照组,高脂饮食模型组脂质氧化增加,但差异不明显;而Gla给药后,光甘草定治疗组和高脂饮食模型组相比,脂质氧化减弱,甚至低于正常对照组,但无统计学意义(p>0.05)。7.ABTS试剂盒检测目的是为了了解机体总抗氧化能力,我们的结果显示:高脂饮食模型组较正常对照组总抗氧化能力减弱,但差异不明显;而Gla给药后,光甘草定治疗组和高脂饮食模型组相比,总抗氧化能力升高,但无统计学意义(p>0.05)。结论本课题研究结果表明动脉粥样硬化模型兔睾丸组织睾酮合成相关蛋白/酶表达降低与其相关睾酮水平减少有关;另外,睾丸组织中存在的氧化应激、内质网应激可能是引起肥胖相关性代谢异常中睾丸Leydig细胞睾酮合成能力减低的重要因素;光甘草定作为抗氧化剂,可以在一定程度上改善睾丸Leydig细胞睾酮合成的能力,对睾丸具有保护作用。