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目的:本文利用小鼠骨髓来源肥大细胞(bone marrow-derived mast cells,BMMCs)、嗜碱性白血病细胞【rat basophilic leukemia(RBL),RBL-2H3】和人肥大细胞(human mast cell,HMC-1)对三萜类化合物23-乙酰泽泻醇B(alisol B 23-acetate,AB23A)的体内外抗炎作用及机制进行研究,为新型抗炎药物的开发提供了理论依据和实验基础。方法:1.利用MTT方法检测不同浓度AB23A在BMMCs、RBL-2H3和HMC-1中无细胞毒浓度范围。2.利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定AB23A对免疫球蛋白E(immunoglobulin E,Ig E)/抗原(antigen,Ag)激活的BMMCs中白三烯C4(leukotriene C4,LTC4)合成、组胺(histamine)释放、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)生成等的影响。利用免疫荧光法测定AB23A对激活BMMCs内Ca2+动员的影响。3.利用Western Blot法检测不同浓度AB23A对Ig E/Ag激活的BMMCs、RBL-2H3及佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和钙离子载体(A23187)激活的HMC-1的不同通路相关蛋白,包括磷脂酶Cγ(phospholipase Cγ,PLCγ)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/核转录因子抑制蛋白/核转录因子(serine-threonine protein kinase/inhibitor of nuclear factor kappa-B kinases/nuclear factor kappa-B,Akt/IKK/NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶/胞浆磷脂酶A2(mitogen-activated protein kinases/cytosolic phospholipase A2,MAPKs/c PLA2)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)等的表达或磷酸化水平的影响。4.利用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)法检测AB23A对Ig E/Ag激活的BMMCs中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)、Src家族激酶Lyn和Fyn相关表达及磷酸化水平的表达。5.利用小鼠被动皮肤过敏反应(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)研究AB23A对Ig E/Ag介导小鼠体内抗炎作用,检测小鼠耳朵中伊文斯兰(Evansblue)的渗出量,并利用甲苯胺蓝染色法(toluidine blue)研究AB23A对小鼠耳肿胀程度及肥大细胞数目的影响。结果:1.MTT结果显示,AB23A浓度为2、5、10和20μM时对BMMCs、RBL-2H3和HMC-1均无明显细胞毒性作用。2.AB23A抑制Ig E/Ag介导BMMCs中组胺释放、LTC4合成、IL-6产生及钙离子动员。3.AB23A抑制Ig E/Ag介导的BMMCs中PLCγ、p38、ERK1/2、Akt、IKKα/β等的磷酸化水平和c PLA2、NF-κB等的核转位。4.AB23A抑制Ig E/Ag介导的BMMCs中Syk的磷酸化水平,但对Lyn及Fyn的磷酸化水平及表达均无影响。5.AB23A抑制Ig E/Ag介导的RBL-2H3及PMA和A23187介导的HMC-1中PLCγ、p38、ERK1/2、Akt、IKKα/β等的磷酸化水平和NF-κB的核转移水平。6.AB23A抑制Ig E/Ag介导的PCA反应,表现为降低Evans blue渗出量、减弱小鼠耳肿胀,但对肥大细胞数量无明显变化。结论:1.AB23A通过抑制Ig E/Ag介导的BMMCs中PLCγ的磷酸化水平抑制钙离子动员;通过抑制Ig E/Ag介导的BMMCs中p38、ERK1/2、c PLA2的磷酸化水平和c PLA2的核转位抑制LTC4的合成;通过抑制Ig E/Ag介导的BMMCs中Akt/IKK/NF-κB途径降低IL-6的产生和COX-2的表达;这些结果可能是依赖于AB23A抑制Ig E/Ag介导的BMMCs中Syk的磷酸化水平引起的。AB23A抑制Ig E/Ag介导的RBL-2H3及PMA和A23187介导的HMC-1中相关信号通路蛋白表达或磷酸化水平,这与AB23A作用于BMMCs中结果一致。2.在体内AB23A同样抑制Ig E/Ag介导肥大细胞激活而不是减少肥大细胞数量来抑制PCA反应。提示AB23A具有良好的体内外抗炎作用,具有成为抗炎先导化合物的潜能。本课题组首次系统地报道AB23A的抗炎作用及机理。