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目的:探讨培养时间、取材来源、保存方式及培养体系成分对CIKs细胞体外细胞扩增倍数、免疫表型及肿瘤杀伤活性的影响,为肿瘤治疗合理科学使用CIKs细胞回输提供实验支持。方法:(1)原代培养肺癌、乳腺癌细胞作为靶细胞备用。(2)健康成人外周血分离单个核细胞,分别以常规CIKs诱导体系、加入肿瘤细胞培养上清液体系和加入DC-CIKs培养上清液体系进行细胞培养。特定时间点检测细胞扩增倍数、相关免疫表型及肿瘤杀伤活性。(3)健康足月产妇胎儿脐血分离单个核细胞以常规诱导体系和加入肿瘤细胞上清液体系进行培养,按(2)中时间及方法进行相关指标检测。(4)冷冻保存两种单个核细胞,并在第7、14、21天复苏,常规诱导体系培养后测定相关指标。(5)常规体系培养14天的CIKs冷冻复苏后进行相关指标检测。结果:(1)常规培养CIKs细胞培养第14天对肿瘤细胞产生明显杀伤作用,21天杀伤活性进入高峰期,35天呈下降趋势;(2)脐血CIKs培养前两周CD3+CD56+细胞比例,肿瘤杀伤活性高于外周血组,21至28天时两者无统计学差别,35天脐血组无下降趋势;(3)加入DC-CIK细胞培养上清液的健康成人来源CIKs细胞CD3+CD56+细胞比例、肿瘤杀伤活性高于常规培养的同来源CIKs;(4)培养时加入肿瘤培养上清液的CIKs细胞扩增倍数,CD3+CD56+细胞比例,肿瘤细胞杀伤活性下降;(5)3周内冻存单个核细胞扩增的CIKs与常规培养CIKs各项特征无明显差别;培养14天的CIKs冻存后,随冻存时间延长肿瘤杀伤活性下降。结论:1、CIKs细胞对于肺癌、乳腺癌细胞在体外均具有杀伤活性,两者间无明显差别,一定时间范围内,延长培养时间可提高CD3+CD56+细胞比例和CIKs肿瘤杀伤活性;2、脐血来源CIKs在体外肿瘤杀伤活性稳定,肿瘤杀伤活性高峰期持续时间长。3、DC-CIKs细胞培养上清液为条件培养基可提高外周血来源CIKs的CD3+CD56+细胞比例及其肿瘤杀伤活性。4、肿瘤细胞培养上清液在培养过程中显著降低CIKs的扩增倍数和肿瘤杀伤活性。5、3周内冻存不影响单个核细胞诱导扩增CIKs的活性;已扩增CIKs1周内冻存不影响其活性。