鲤免疫相关基因RIV-Ⅰ、MAVS、TRAF3和TBK1的分子克隆及表达分析

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunday_rectina
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
固有免疫系统是机体抵御各种病原体入侵的第一道防线。固有免疫系统发挥重要作用的关键之一是存在种系编码(germ-line encoded)的模式识别受体(pathogen recognition receptors,PRRs),PRRs能够识别多种“非己”异物共同表达的分子,即病原相关分子模式(pattern associated molecular patterns,PAMPs)。RIG-I就是一种位于细胞质中、能够识别病毒5ppp-ssRNA(5-triphosphatesingle-stranded RNA)和短的dsRNA(double-stranded RNA)的PRR。RIG-I与配体结合后,相继导致下游一系列分子如MAVS、TRAF3和TBK1的活化,最终激活IRF3和IRF7,从而诱导Ⅰ型干扰素和干扰素调节基因(interferonstimulated genes,ISGs)的大量表达,建立机体的抗病毒反应。   本研究通过同源克隆和RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术获得了鲤RIG-I病毒识别受体途径中的4个关键分子RIG-I、MAVS、TRAF3和TBK1的全长cDNA,并进行了分子结构和进化分析,结果如下:1)鲤RIG-IcDNA全长为3378bp,编码946个氨基酸,结构域组成与哺乳类RIG-I一致,从氨基端到羧基端分别为两个CARD结构域(Caspase activation and recruitmentdomain)、一个DExD/H(DEAD-like helicases superfamily)、一个HELICc(helicasesuperfamily c-terminal domain)结构域和一个短的RD结构域(repressor/regulatorydomain)。2)鲤MAVS cDNA全长为3375bp,编码585个氨基酸,氨基端具有一个CARD结构域,中间具有富含脯氨酸的区域。羧基端具有一个短的跨膜区。另外,我们还获得了一个MAVS异构体,MAVS异构体氨基端缺少CARD结构域。鲤MAVS与其他物种的MAVS氨基酸序列一致性程度低。3)鲤TRAF3 cDNA全长为2916bp,编码573个氨基酸,从氨基端向羧基端分别为一个RING(really interesting new gene)结构域、两个锌指结构、一个coiled coil和一个MATH(meprin and TRAF-C homology)结构域。鲤TRAF3与其他物种的TRAF3氨基酸序列一致性程度高。4)鲤TBK1 cDNA全长为2622bp,编码727个氨基酸,氨基端具有一个保守的S_TKc结构域(Serine/Threonineprotein kinases,catalytic domain)。鲤TBK1与其他物种的TBK1氨基酸序列一致性程度高。系统进化分析显示,鲤RIG-I、MAVS、TRAF3和TBK1均与其他鱼类的同源分子聚为一支。   通过荧光定量PCR技术分析了RIG-I、MAVS、TRAF3和TBK1 mRNA在健康鲤鱼多种组织中的表达情况。这些基因在所有被检测组织中均有表达,其中,RIG-I mRNA在肝脏和血液表达较高,其次是脾脏、胸腺和皮肤,在头肾中最低;MAVS mRNA在不同组织中的表达差别较大,在小肠、肝脏和肾脏中表达较高,其次是脾脏、血液、胸腺和脑,在鳃中表达最低;TRAF3 mRNA在血液中表达最高,其次是肝脏和脾脏,在鳃中表达最低;TBK1 mRNA的组织表达情况与TRAF3相似,在肝脏和血液中表达较高,其次是脾脏和胸腺,在鳃中最低。   通过荧光定量PCR技术分析了在SVCV(spring viraemia of carp virus,SVCV,鲤鱼春季病毒血症病毒,简称鲤春病毒)诱导条件下,鲤RIG-I、MAVS、TRAF3、TBK1、IRF3和IRF7 mRNA在脾脏、头肾和小肠中的表达变化情况。RIG-I、MAVS、IRF3和IRF7在脾脏、头肾和小肠中都有明显的上调表达,其中,这些基因在小肠中上调幅度最大,其次是头肾,在脾脏中最小。TRAF3和TBK1头肾和小肠中都有不同程度上调表达,但上调幅度比其他基因要小很多;而TRAF3和TBK1在脾脏中没有明显的上调表达。   以上结果提示,在鲤鱼感染SVCV条件下,特别是在小肠组织中,IRF-3/7的上调表达模式与RIG-I/MAVS/TRAF3/TBK1的上调表达模式基本一致,RIG-I识别病毒后可能能够通过MAVS/TRAF3/TBK1信号途径激活抗病毒反应。
其他文献
链霉菌是重要的抗生素及其他医畜用药物的产生菌。这些药物主要是伴随着菌体复杂的形态分化、通过严格的次级代谢合成途径产生的。无论是形态变化还是代谢合成,响应菌体内外影
伴随着高科技的不断发展,人们对信息获取方式的高效性及便捷性也提出了更高的要求。利用手机访问因特网无疑是未来人们信息获取手段的主要发展方向。而这项基于嵌入式产品的应
高中英语书面表达在一定程度上是衡量学生英语整体素养的重要指标,相对于词汇、句型、语法、阅读来说,书面表达是英语学习中较难的部分。目前,高中生在英语书面表达的学习中经常
建筑项目管理需要关注管理过程中潜在的各种风险因素,有效预防和解决建筑项目管理风险,确保管理活动的科学有效.本文结合实践工作经验,分析了建筑项目管理常见的风险类别,总
随着通信和移动互联网的发展,语音编码的发展速度越来越快,国际电信联盟也在不断的更新编码方案,G.726是国际电信联盟建议的一种波形编码方式,其特点是编码语音质量高,延时短,稳定
高速公路全程跟踪系统是智能交通系统ITS 的一个重要应用,是集GPS 技术、GIS 技术、光纤通信技术、无线通信技术和控制技术于一体的综合管理系统。针对目前高速公路现有机电
本文分析计算机网络安全的漏洞及防范措施,总结当前计算机网络安全方面存在的突出问题,并给出具体的应对方案.搭建完善、高效的计算机网络安全防护系统,在充分发挥计算机及网
雌激素受体(Estrogen Receptor, ER)是核受体超家族的成员之一,是一类重要的转录调控因子,是治疗乳腺癌、骨质疏松等疾病的重要药物作用靶标。选择性雌激素受体调节剂在治疗ER相关疾病上具有很高的临床应用价值。我们通过计算机虚拟筛选和生物实验相结合的手段来寻找新的选择性ER配体。首先我们采用分子动力学结合虚拟筛选的策略,从商业数据库中搜寻选择性ER配体。通过分子动力学模拟得到ER晶体结
激光加工技术是光机电一体化技术中的重要组成部分,其中激光标刻技术凭借标刻永久、速度快、非接触、无污染等优势,已成为包装应用领域中最富有生命力的技术,并向着信息化、网络
学位