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目的:1.观察软骨细胞中caspase-1在软骨细胞焦亡的效应;2.探讨caspase-1促发软骨细胞焦亡的潜在机制;3.探讨Caspase-1抑制剂Ac-YVAD-cmk抑制软骨细胞焦亡的可能机制。方法:本实验采用C28软骨细胞,用培养基(即1%的包含青霉素和链霉素混合形成的液体,5-10%的胎牛血清,90%-95%不含胎牛血清的DMEM)进行传代培养。细胞系按实验处理条件不同分为4组,正常对照组:(加入与诱导剂同体积的saline);Ac-YVAD-cmk诱导组(10μM Ac-YVAD-cmk);Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组(10μM Ac-YVAD-cmk、10μg/ml LPS和5m M ATP);LPS+ATP诱导组(10μg/ml LPS和5m M ATP)。药物干预处理后,各组细胞分别进行CCK-8细胞增殖-毒性检测,LDH检测,Western Blot和细胞爬片的免疫组化检测caspase-1、GSDMD和GSDMD-N的含量。结果:1.CCK-8细胞增殖-毒性检测相对于正常对照组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组和LPS+ATP诱导组的细胞生存率明显减低(P<0.01)。相对于LPS+ATP诱导组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组的细胞生存率明显增加(P<0.01)。2.LDH活性检测相对于正常对照组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组和LPS+ATP诱导组释放的LDH显著增多(P<0.01)。相对于LPS+ATP诱导组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组的LDH释放显著减少(P<0.01)。3.Western Blot测caspase-1,GSDMD和GSDMD-N的含量(1)Caspase-1:相对于空白对照组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组和LPS+ATP诱导组的相对灰度值明显增高(P<0.01)。相对于LPS+ATP诱导组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组的相对灰度值明显降低(P<0.01)。(2)GSDMD:相对于空白对照组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组和LPS+ATP诱导组的相对灰度值明显增高(P<0.01)。相对于LPS+ATP诱导组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组的相对灰度值明显降低(P<0.01)。(3)GSDMD-N:相对于空白对照组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组和LPS+ATP诱导组的相对灰度值明显增高(P<0.01)。相对于LPS+ATP诱导组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组的相对灰度值明显降低(P<0.01)。4.细胞爬片的免疫组化检测caspase-1,GSDMD和GSDMD-N的荧光强度(1)Caspase-1:相对于正常对照组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组和LPS+ATP诱导组的荧光强度明显增高(P<0.01)。相对于LPS+ATP诱导组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组的荧光强度明显降低(P<0.01)。(2)GSDMD:相对于正常对照组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组和LPS+ATP诱导组的荧光强度明显增高(P<0.01)。相对于LPS+ATP诱导组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组的荧光强度明显降低(P<0.01)。(3)GSDMD-N:相对于正常对照组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组和LPS+ATP诱导组的荧光强度明显增高(P<0.01)。相对于LPS+ATP诱导组,Ac-YVAD-cmk+LPS+ATP诱导组的荧光强度明显降低(P<0.01)。结论:1.LPS联合ATP诱导的caspase-1的激活是促发软骨细胞焦亡的重要因素;2.Caspase-1抑制剂Ac-YVAD-cmk通过抑制GSDMD蛋白表达来减弱软骨细胞焦亡的产生,这将为OA的临床治疗提供新的策略。