目的:研究胰损伤后再生过程中胰干细胞在胰组织中的分布、分化及增殖变化,探讨胰间充质干细胞及其分泌信号对胰干细胞分化的作用及机制,为胰岛再生的分子调控机制及糖尿病干细胞治疗的研究提供相关的实验依据。方法:采用胰管结扎(Pancreatic duct ligation,PDL)术构建胰损伤再生模型。35只健康SD大鼠(雌、雄均有,体质量260±10g)随机分为正常对照组、假手术组和模型组,模型组再分PDL 1d组、PDL 3d组、PDL 5d组、PDL 7d组、PDL 9d组,共7组,每组5只。模型组于胰尾总管处结扎阻断胰体、尾部胰管构建PDL模型,假手术组仅打开腹腔暴露胰,不行胰管结扎。各组胰头、胰体尾部分别取材进行组织学处理,观察胰损伤后胰组织内的细胞增殖及分化,并采用免疫组化SABC染色法、免疫荧光双染法及Western Blot技术检测Nestin、CD44蛋白的表达、分布及变化。结果:(1)正常对照组及假手术组:(1)正常对照组及假手术组中,Brd U阳性细胞数量较少,主要分布于导管上皮、胰岛细胞和腺泡细胞;(2)Nestin、CD44在正常对照组及假手术组均有少量表达,阳性细胞主要分布于导管上皮和腺泡细胞。(2)PDL模型组:(1)Brd U阳性细胞分布及计数:模型组Brd U阳性细胞主要分布于导管和腺泡,与对照组相比,阳性细胞数1 d时无明显变化,3 d时阳性细胞数明显增多,并在5 d达到高峰,7 d后逐渐下降。(2)Nestin表达:与对照组相比,模型组Nestin的表达1 d时变化不明显,3 d时表达明显升高,5 d时达到高峰,7 d后表达开始逐渐下降。(3)CD44表达:与对照组相比,模型组CD44的表达1 d时开始升高,在5 d时达到高峰,7 d后表达开始逐渐下降。(3)免疫荧光双染结果:免疫荧光双染结果显示,模型组胰体尾部胰间质内可见胰间充质干细胞呈Nestin~+/Brd U~+、CD44~+/Brd U~+及CD44~+/Insulin~+免疫阳性反应。结论:胰管结扎后胰再生过程中,Nestin、CD44的表达明显上调,尤其是胰间质内的间充质干细胞大量增殖,并呈Nestin、CD44及Insulin阳性。胰间充质干细胞及其分泌因子在PDL术后的胰干细胞分化中可能起着重要的调控作用,其调控机制可能是通过间充质干细胞分化及其信号的激活与表达,形成胰干细胞分化的微环境,促进胰干细胞的增殖与分化。