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流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。几十年来,人流感的流行一直以A型H3/H1亚型以及B型流感为主,禽流感的流行以A型H5/H7/H9亚型为主,其流行已造成了巨大的损失。近年来,禽流感病毒的多个亚型(H5/H7/H9/H10)开始不断突破种间屏障感染人类,并可能造成大流行。当前,传统的流感疫苗已无法有效应对这一趋势,各国学者纷纷进行新型流感疫苗的开发以应对流感跨种传播及多亚型并存的现状。本论文即拟对多亚型流感病毒复合多表位核酸疫苗进行研究。在搜集已发表流感功能表位的基础上,应用生物信息学理论对H1/H3/H5/H7/H9亚型的保护性抗原血凝素及神经氨酸酶进行了CTL、Th、B细胞表位的预测和筛选分析。设计组建了多表位功能基因盒,并进行了人工模拟优化,应用体外实验方式分析了预测的Th和B细胞功能表位抗原性。根据针对所属动物及预防目的的不同,我们构建了三种主导型H3/H1(针对人),H5/H3(针对人和猪),H5/H7(针对人和禽)的复合多表位核酸疫苗,通过RT-PCR及间接免疫荧光方法证实疫苗中各抗原组分可有效表达。最后,我们将所构建的复合多表位核酸疫苗进行了小鼠、猪、鸡的实验免疫研究,通过对ELISA及HI抗体水平、淋巴细胞刺激指数、IFNγ-ELISPOT和T淋巴细胞亚类数量、血清细胞因子含量等指标的综合分析,对不同复合多表位疫苗进行了免疫原性评价。结果显示,复合多表位疫苗组在针对主要抗原的抗体水平与不含表位组相当的情况下,表位相关抗原的抗体水平显示了一定的优势。表位相关抗原的淋巴细胞刺激指数显著升高,IFNγ-ELISPOT斑点数不同程度增加。复合多表位疫苗免疫组CD4~+T淋巴细胞数量和血清Th2类细胞因子含量显著增加。以上结果证实,复合多表位疫苗在诱导细胞及体液免疫方面均显示了优势,与各免疫对照组相比复合多表位DNA疫苗诱导的机体整体免疫水平最优。本研究对可同时预防多种亚型流感病毒,可对多种动物免疫保护,可提供机体长久免疫保护的跨种通用流感疫苗进行了有益尝试。