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第一部分结合单克隆抗体的靶向PLGA-COOH造影剂的制备及其体外寻靶实验目的:采用共价结合的方法制备靶向高分子超声造影剂,并考察其体外寻靶能力。方法: 1、以羧基端乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA-COOH)为成膜材料,采用双乳化法和冷冻干燥技术制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;以普通光学显微镜观察其形态、大小分散度情况,马尔文激光粒度仪检测其粒径及分布。2、采用EDC/NHS[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺]作为偶联活性剂,以碳二亚胺法将PLGA-COOH超声造影剂表面上的羧基与人肝癌Hab18单克隆抗体上的氨基共价结合,制备靶向高分子超声造影剂;采用光学显微镜及激光共聚焦观察该靶向高分子超声造影剂与肝癌细胞7721在体外的寻靶结合能力。结果:1、采用本方法制备的PLGA-COOH超声造影剂,外观为白色粉末状物质,平均粒径约(635.5±55) nm。微泡水溶性好,生理盐水复溶后普通光学显微镜观察,其形态规则、呈球形,表面光滑,大小均匀,分散度好,微泡间无明显粘连、聚集现象;2、体外寻靶试验显示,该靶向高分子超声造影剂与普通PLGA-COOH造影剂对照能聚集并牢固结合到肝癌7721细胞表面。结论:采用碳二亚胺法,通过共价结合的方式,成功制备出靶向PLGA-COOH超声造影剂,该靶向造影剂在体外具有较强的特异性寻靶结合能力。第二部分结合链霉亲和素的靶向PLGA-COOH造影剂制备的实验研究目的:将链酶亲和素以共价结合的方式连接在PLGA-COOH超声造影剂表面,通过与生物素化抗体结合,制备靶向PLGA-COOH超声造影剂,并考察其体外寻靶结合能力。方法:采用EDC/NHS[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺]作为偶联活性剂,以碳二亚胺法将PLGA-COOH超声造影剂表面上的羧基与链酶亲和素上的氨基共价结合,制备表面连接链酶亲和素的PLGA-COOH超声造影剂。采用红外与免疫荧光检测链酶亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况。将生物素化人肝癌Hab18单克隆抗体与连接链酶亲和素的PLGA-COOH超声造影剂结合,制备靶向高分子超声造影剂;采用光学显微镜及激光共聚焦观察该靶向高分子超声造影剂与肝癌细胞7721在体外的寻靶结合能力。结果:红外与免疫荧光检测显示链酶亲和素通过共价键成功的连接在高分子造影剂上,并存在活性。体外寻靶试验显示靶向PLGA-COOH超声造影剂与普通PLGA-COOH超声造影剂对照能聚集并牢固结合到肝癌7721细胞表面。结论:成功制备出结合亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细7721胞具有较强的特异性亲和力。