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目的:1、制备包载经聚乙二醇(PEG)修饰的rAd-EGFP-HIF-1a重组腺病毒的乳酸/羟基乙酸共聚物(Polylactic-co-glycolic acid,PLGA)超声造影剂。2、检测该PLGA超声造影剂的物理性质、体外释放病毒规律、体外释放病毒转染效率及其产生的免疫反应程度。方法:1、重组腺病毒的PEG修饰,制得PEG-Adv。2、采用双乳化法制备载PEG-Adv和载Adv的PLGA超声造影剂。3、采用扫描电子显微镜观察该两种超声造影剂的表面形态;使用Malvern激光粒径测量仪检测该造影剂粒径分布频率及均值;紫外分光光度计测定其包封率及体外释放病毒规律;用ELISA法检测其产生的免疫反应程度。结果:1、按每个病毒颗粒衣壳蛋白质含7500个赖氨酸残基计算活化的甲氧基聚乙二醇(mPEG-SPA)用量,mPEG-SPA与Lys为1:1摩尔比加入相应量得mPEG-SPA,制得PEG-SPA。2、载PEG-Adv的PLGA和载Adv的PLGA分布均匀,形态相似,平均粒径分别为6.23±1.2μm、6.19±1.0μm;包封率分别为17.23%、14.35%;PEG-Adv和单纯Adv从PLGA释放规律相似,但从PLGA释放出来的PEG-Adv的转染效率比从PLGA释放出来的单纯Adv要高;包载PEG-Adv的PLGA产生的免疫反应强度也较低。结论:用PLGA超声造影剂包载PEG化的重组腺病毒rAd-EGFP/ HIF-1α,可改善Adv在体内安全性差的缺点,释放出来的病毒稳定性好,转染效率较高,其作为心血管疾病的基因治疗载体具有较好的研究前景。第二部分结合单克隆抗体的靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA造影剂的制备及其体外寻靶实验目的:采用共价结合的方法制备靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂,并考察其体外寻靶能力。方法:采用EDC/NHS[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺]作为偶联活性剂,以碳二亚胺法将包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂表面上的羧基与抗人E-seletin单克隆抗体上的氨基共价结合,制备靶向高分子超声造影剂;采用光学显微镜观察该靶向PLGA-COOH造影剂与人脐静脉血管内皮细胞在体外的寻靶结合能力。结果:体外寻靶实验显示,该靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH超声造影剂能聚集并牢固结合到人脐静脉血管内皮细胞表面。结论:采用碳二亚胺法,通过共价结合的方法,成功制备出靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂,该靶向造影剂在体外具有较强的特异性寻靶结合能力。