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纤维素是地球上分布最广、数量最大、含量最丰富的可再生资源,其生物合成和生物降解维持生物圈的主要碳循环。近年来,由于人口数量膨胀、石化资源的短缺、生态环境的破坏以及全球气候的恶化,使纤维素生物质转化及开发纤维素酶新工艺具有重大的战略意义。在转化纤维素生物质和开发纤维素酶的过程中,细菌由于其繁殖快、产酶速度快、发酵周期短等优势,发挥着重要作用。 本实验对筛选出的五株具有较高活性产纤维素酶的细菌进行了鉴定,这五株菌株的菌落形态、菌体形态和生理生化试验指标与芽孢杆菌属的基本特征一致,同时,它们16SrDNA序列及同源性都与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的16SrDNA序列有99.0%同源性,并且通过构建系统进化树上发现它们和枯草芽孢杆菌具有较近的遗传距离。 对影响产纤维素酶活的三个因素:培养时间、温度和pH进行了单因子实验研究,得出芽孢杆菌(Bacillus sp)GDW产纤维素酶的最佳条件:pH4.0,温度40℃,培养时间24h。 采用Plackett-Burman法对产纤维素酶芽孢杆菌(Bacillus sp)GDW产纤维素酶的液态培养基组分进行了显著性分析,发现羧甲基纤维素钠、硫酸铵和硫酸镁为显著因素(P<0.05)。采用Box-Wilson中心组合设计对影响 CMCase酶活的三个因素,CMCase酶活为响应值进行响应面优化,优化后发酵培养基组成(g/L)为:羧甲基纤维素钠21.33g,硫酸铵10.865g,硫酸镁1.113g,磷酸二氢钾2.0g,氯化钙0.3g。在此条件下CMCase最大酶活为154.2573U/mL,较原始培养基提高了5.70%。 GDW菌所产CMCase的最适酶促反应温度为55℃,最适反应pH值为7.5,且在pH7.0~8.0范围内都保持着较好的稳定性。Na+、K+、Fe2+、Mg2+、Cu2+和Ca2+对纯化CMCase酶活有激活作用;而 Ba2+、Mn2+、Fe3+、Zn2+、Ag+、SDS和EDTA对CMCase在酶促反应中均有抑制作用。