彗星试验方法的初步研究

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彗星试验方法的初步研究彗星试验(Comet assay)又称单细胞凝胶电泳试验(SCGE),是一种快速、灵敏的检测单个细胞DNA断裂的新技术,由于其具备其它试验无可比拟的优越性,因此应用前景十分广泛。为了在本实验室建立该方法,扩展该方法在农药安全性评价中的应用,本研究采用公认的DNA断裂剂重铬酸钾溶液为试验材料,设5个试验剂量,分别为12.5、25.0、50.0、100.0、500.0μmol/L, 处理CHL细胞2个小时,然后对CHL细胞进行单细胞凝胶电泳试验。从细胞的彗星图和试验数据分析可以看出,随着重铬酸钾溶液浓度的增大,彗星尾长明显增长,说明重铬酸钾溶液剂量越大,对CHL细胞DNA的损伤越严重,且不同浓度重铬酸钾溶液与CHL细胞DNA损伤之间存在着明显的剂量-效应关系。这些结果表明在本实验室条件下基本建立起来了该方法,并且找出了适合本实验室条件下的CHL细胞彗星试验方法的条件:<WP=10>最合适的制片条件,改良的细胞染毒方式,受试物处理CHL细胞时间至少为2小时,细胞裂解时间为2~2.5小时,DNA解旋时间为30分钟,在电压18~25V、电流200~300mA下,电泳20~30分钟。
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