背景与目的肺癌（LC）,是当今世界上发病率和致死率最高的恶性肿瘤。早期诊断、及时的手术根治性切除对于LC患者预后具有重大意义,但传统的诊断方法如影像学、组织病理学具有局限性,常规肿瘤标志物亦存在敏感性或特异性不足等问题。肿瘤相关抗原（Tumor-associated antigens,TAAs）的异常表达可刺激自身抗体的大量释放,针对TAAs自身抗体的检测有助于癌症的早期诊断。在先前的研究中,课题组通过高通量蛋白芯片（Hu Prot v3.0）技术发现早期LC患者血清中针对TIF1γ的IgA型自身抗体水平升高。TIF1γ与肿瘤的相关性近来引起关注,我们通过免疫组织化学法的检测发现TIF1γ蛋白在LC早期患者癌组织中存在异常高表达。在此基础上,我们拟通过酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法的检测,深入探讨针对TIF1γ的四种Ig类型（IgA、IgG、IgM、IgE）自身抗体在LC早期患者血清的表达情况以及其对LC的早期诊断价值;进一步研究TIF1γ表达改变对LC细胞生物学行为的影响,阐明其在LC发生发展中的潜在作用。方法1.通过免疫组织化学法检测60例早期LC患者癌组织及配对癌旁组织的TIF1γ蛋白表达。2.构建ELISA法检测248例早期LC患者、172例晚期LC患者、200例肺部良性病变（LBL）及218例健康对照（HC）的血清抗TIF1γ-IgG、IgA、IgM、IgE水平,分析其检测对早期LC的诊断价值。3.采用免疫印迹法（western blot）验证血清抗TIF1γ-IgA与抗TIF1γ-IgG的ELISA检测结果。4.通过实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,RT-qPCR）和western blot检测H460、H226、H1299、SK-MES-1及A549共5种LC细胞株TIF1γ表达量,从中筛选出TIF1γ基因相对高表达与相对低表达细胞株进行后续实验。5.构建TIF1γ过表达慢病毒转染TIF1γ相对低表达的A549细胞使TIF1γ过表达,si RNA转染TIF1γ相对高表达的H460细胞使TIF1γ表达沉默,通过RT-qPCR和western blot法验证LC细胞TIF1γ过表达及敲低的效果。6.通过CCK-8法检测细胞TIF1γ过表达及敲低后细胞活力变化,绘制细胞生长曲线。7.流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期分布。8.Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果1.LC早期患者癌组织TIF1γ蛋白表达阳性率83.33%（50/60）,明显高于配对癌旁组织25.00%（15/60,P0.05）;抗TIF1γ-IgG与抗TIF1γ-IgA的水平与阳性率均明显高于LBL、HC组（P<0.05）,其中抗TIF1γ-IgA对LC早期患者的诊断敏感性28.20%（特异性95.93%）、AUC 0.704,抗TIF1γ-IgG对LC早期患者的诊断敏感性18.54%（特异性94.25%）、AUC 0.622,二者的联合检测对于LC早期患者的诊断敏感性38.31%（特异性92.34%）、AUC 0.734。3.血清标本抗TIF1γ-IgA与抗TIF1γ-IgG的western blot检测结果与ELISA的检测结果一致。4.RT-qPCR和western blot结果显示,5种LC细胞株均有TIF1γ表达,其中以A549细胞中TIF1γ相对表达量最低,H460细胞相对表达量最高。选取这两株细胞进行后续实验。经验证,成功构建TIF1γ过表达的A549细胞株及TIF1γ敲低的H460细胞株。5.与阴性对照组相比,TIF1γ过表达的A549细胞活力、迁移和侵袭能力明显降低,G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显减少（P<0.01）;TIF1γ敲低的H460细胞活力、迁移和侵袭能力明显增强,G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增多（P0.05）。结论1.TIF1γ在早期LC患者癌组织的异常高表达与血清针对TIF1γ的IgA与IgG型自身抗体的大量释放密切相关;抗TIF1γ-IgA与抗TIF1γ-IgG对LC具有早期诊断价值,且抗TIF1γ-IgA的诊断性能优于抗TIF1γ-IgG;抗TIF1γ-IgA与抗TIF1γ-IgG的联合检测可进一步提高诊断性能,有助于LC患者的早期诊断。2.TIF1γ可能是LC的一种潜在抑癌因子,其表达可抑制LC细胞活力、迁移和侵袭能力,并阻滞细胞周期于G0/G1期。