目的:以神经血管单元以及Notch信号通路为研究的切入点,结合藏医传统理论和临床经验,探究藏医治疗隆滞布病所采用的时辰组合治疗方案(早上灌服七十味珍珠丸、上午灌服如意珍宝丸、晚上灌服二十味沉香丸)对大鼠脑缺血再灌注损伤产生的药物效应及调节靶点,为藏医隆滞布病的特色治疗方式提供现代生物学的相关实验数据。方法:通过文献研究探讨藏医隆滞布病相关病因、病机、治疗方面的理论基础,深入挖掘藏医应用时辰组合用药治疗方式的理论依据并总结其指导原则。在本团队前期数据挖掘研究的基础上,针对藏医治疗隆滞布病的时辰组合用药方案(早上灌服七十味珍珠丸、上午灌服如意珍宝丸、晚上分灌服二十味沉香丸)开展药物效应及调节机制的动物实验研究;采用线栓法制备中动脉栓塞再灌注大鼠的动物模型,将实验大鼠随机均等地分为假手术组、模型组、阳性对照组、七十味珍珠丸组、二方组合用药组和三方组合用药组,各组内的4个亚组分别给药1d、3d、7d和15d;以神经血管单元以及Notch信号通路为研究内容,采用神经行为学检测、组织病理染色检测、外周血液状态检测及蛋白印迹检测的方法,从多个角度阐释藏药时辰组合用药方案对脑缺血再灌注大鼠神经和肢体功能修复、血液流变特性及大脑海马组织中Ang-1、Notch1、Jagged1蛋白表达水平的调节作用,明确藏医应用时辰组合方案治疗隆滞布病的药物效应及调节机制。结果:(1)藏医学认为隆滞布病是由于机体受到外界环境如气候、季节、昼夜、地域、饮食或者内部原因如自身元气变化、情志杂念等多种因素所造成隆、赤巴、培根出现增、损和紊乱的变化,打破彼此均衡的状态而导致的。由于三大因素在量和位两个方面出现失稳、失衡的动态变化,造成相关特性和功能的异常,使得机体的多个方面出现病理损伤,最终隆滞布病突出表现出与隆、血、脉失调相关的临床症状,并且发病时间及转归趋势具有一定的昼夜节律性,即日暮、黎明的时段内隆病较易出现发展转变的趋势。藏医学融合历算体系、整体观念的具体内容,以时间节律变化、藏药特性和病情状况为指导原则,结合隆滞布病的特殊症状表现,采取方剂联合和因时服用的时辰组合方式进行整体的药物治疗,并在临床中发展出常用的时辰药物组合方案即早上、上午和晚上分别服用七十味珍珠丸、如意珍宝丸和二十味沉香丸。(2)上述组合的动物实验研究结果:①行为学检测:假手术组的行为学评分相比各造模组,均存在显著性差异(P<0.05)。再灌注1d和3d的平衡木行走实验和网屏实验以及再灌注1d的肢体放置实验结果显示,各造模组之间无明显差异(P>0.05)。再灌注7d和15d的平衡木行走实验和肢体放置实验结果发现,七十味珍珠丸组、二方组合用药组、三方组合用药组相比同时间的模型组均存在显著性差异(P<0.05),特别是三方组合用药组相比同时间的阳性对照组存在统计学差异(P<0.05)。其中,再灌注7d时三方组合用药组肢体放置实验的评分优于同时间的七十味珍珠丸组(P<0.05)。再灌注7d和15d的网屏实验中,三方组合用药组相比同时间的模型组存在统计学差异(P<0.05)。不同时间的同组内比较结果显示,相比再灌注1d和3d的两个时间点,再灌注7d的三方组合用药组和15d的七十味珍珠丸组、二方组合用药组、三方组合用药组在平衡木行走实验和肢体放置实验中均存在显著性差异(P<0.05)。②病理染色:HE染色结果发现,模型组出现清晰的缺血性核心和半影,核固缩明显并出现软化灶。再灌注7d和15d时,模型组脑组织排列出现轻微改善,二方时辰用药组、三方时辰用药组相对于同时期的模型组,出现细胞核形态及软化灶的明显改善。不同时间点的同组内比较结果显示,再灌注7d和15d时,七十味珍珠丸组、二方时辰用药组和三方时辰用药组的神经元形态呈现不同程度的恢复,神经元水肿明显缓解。③血液流变学:相比假手术组,各造模组血液流变指标均出现升高并差异显著(P<0.05)。再灌注1d的结果显示,各造模组之间无明显差异(P>0.05)。再灌注3d时,三方组合用药组的红细胞压积、红细胞宽度变异系数、平均血小板体积显著低于模型组(P<0.05)。再灌注7d和15d的结果表明,相比同时间的模型组,七十味珍珠丸组、二方组合用药组、三方组合用药组在红细胞压积、红细胞宽度变异系数和平均血小板体积指标上均出现显著降低(P<0.05),三方组合用药组的红细胞压积、红细胞宽度变异系数和血小板分布宽度显著低于阳性对照组(P<0.05),其中,三方组合用药组的红细胞压积低于七十味珍珠丸组(P<0.05)。再灌注15d时,相比同时间的模型组,七十味珍珠丸组、二方组合用药组、三方组合用药组的血小板分布宽度指标均出现显著降低(P<0.05)。不同时间的同组内比较结果显示,各造模组的血液流变指标出现先升高后下降的变化趋势,再灌注3d达到最高值。相比再灌注3d,7d和15d的七十味珍珠丸组、二方组合用药组、三方组合用药组在红细胞压积、平均血小板体积方面均存在显著性差异(P<0.05),再灌注7d的七十味珍珠丸组、二方组合用药组、三方组合用药组和15d的三方组合用药组在红细胞宽度变异系数方面均具有显著性差异(P<0.05),15d的治疗各组在血小板分布宽度方面均出现显著差异(P<0.05)。④Western Blot:再灌注1d的结果显示,各造模组之间的Ang-1、Notch1、Jagged1的蛋白表达出现升高,但无明显差异(P>0.05)。再灌注3d的结果显示,三方时辰组合用药组的Ang-1、Notch1、Jagged1的蛋白表达出现升高,分别相比阳性对照组、模型组和假手术组均存在统计学意义(P<0.05)。再灌注7d和15d的结果表明,三方时辰组合用药组的Ang-1、Notch1、Jagged1的蛋白表达高于假手术组和模型组,差异显著并存在统计学意义(P<0.05)。再灌注15d时,三方时辰组合用药组的Ang-1、Notch1、Jagged1的蛋白表达显著高于七十味珍珠丸组(P<0.05)。结论:藏医治疗隆滞布病所采用的时辰组合方案在早上和上午使用针对性的药物如七十味珍珠丸和如意珍宝丸调节隆、血、脉运行,而在早上和晚上着重应用调和隆的七十味珍珠丸和二十味沉香丸,不仅顺应隆的昼夜盛衰趋势以及隆滞布病的转归周期,而且契合胃火旺盛的趋势以促进药物的吸收代谢,达到有效纠正三大因素失衡、紊乱的治疗目的。进一步的实验结果表明,该方案通过降低外周血液的HCT、RDW、MPV和PDW,上调海马组织中Ang-1、Notch1、Jaggedl的蛋白表达,有效改善再灌注大鼠的神经及肢体的功能状况。最终,本研究证实藏药时辰组合治疗方案能够对大鼠脑缺血再灌注损伤机制的多个靶点产生积极的治疗作用,尤其是该方案激活Notch信号通路并发挥神经血管单元的保护作用,值得进一步深入研究。