近年来,骨质疏松症的发病率急剧上升,作为一种全身性的骨骼疾病,患者遭受到极大痛苦且治疗成本高。目前,主要用于该疾病治疗的抗骨吸收药物毒副作用强且对整个骨转换的过程会造成一定影响。因此,开发对骨环境更加友好、更加安全长效的药物是非常必要的。破骨细胞作为唯一具有骨吸收功能的细胞,在很大程度上影响了骨质疏松症的发生进程。G蛋白偶联受体作为广泛应用的药物靶点,在骨质疏松症的治疗中也发挥了重大作用。本论文从破骨细胞膜上的G蛋白偶联受体入手,筛选出在破骨细胞中表达程度较高,具有研究意义的G蛋白偶联受体,进一步探索了其对于破骨细胞发育的表型影响以及可能的影响机制,为以G蛋白偶联受体为靶点所进行的骨质疏松症治疗提供了一定的研究思路和理论依据。本课题主要涉及以下研究内容:(1)提取野生型小鼠单核细胞和成熟破骨细胞的RNA,通过RNA测序技术比较、分析得出一种在成熟破骨细胞中表达量较高的G蛋白偶联受体基因-Gpr125。而且在从单核细胞向成熟破骨细胞分化的进程中,该基因的表达量也显著提高。实验结果表明,Gpr125的特异性表达预示着其具有一定的研究价值。(2)通过qRT-PCR技术验证了在RNA水平上Gpr125基因的确会随着破骨细胞的发育逐渐增加。蛋白免疫印迹技术的实验结果说明,与单核细胞相比,GPR125在成熟破骨细胞中的表达量较高。免疫组织化学及免疫荧光实验结果表明,在野生型小鼠股骨组织切片中,GPR125有一定水平的表达且其与破骨细胞标志性基因的表达有一定重合性。GPR125可能会影响破骨细胞的发育。(3)利用sh RNA慢病毒和过表达慢病毒来实现成熟破骨细胞内Gpr125基因的功能失活和功能获得。进一步通过q RT-PCR以及蛋白免疫印迹验证了,经慢病毒感染后破骨细胞内Gpr125基因成功实现了敲低或过表达。同时,通过多种细胞染色方法对慢病毒感染组与对照组细胞在发育过程中的形态、抗酒石酸酸性磷酸酶的活性、分泌氢离子的功能、特殊骨架结构的形成以及骨吸收功能等进行了比较。通过进一步收集不同组别的RNA以及蛋白质进行分析可知,GPR125能够正向调节破骨细胞的发育。(4)通过研究核因子κB受体活化因子配体(Receptor Activator for Nuclear Factor-κB Ligand,RANKL)或者脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激破骨细胞发育时,MAPKs信号通路中特殊蛋白的磷酸化变化,我们进一步对GPR125影响破骨细胞发育的机制进行了探究。结果表明,GPR125会通过促进MAPKs通路来促进破骨细胞的发育进程。