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乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）所引起的世界范围的传染性疾病，其包膜蛋白乙肝表面抗原（Hepatitis B surface antigen，HBsAg）是感染HBV的重要标志。目前临床检测血清（浆）中HBsAg常用以酶标板为载体双抗体夹心ELISA法。磁分离酶联免疫测定法（Magnetic affinity immunoassay，MAIA）是20世纪80年代出现的一种检测方法。将酶联免疫检测系统与磁性微粒分离系统相结合，具有高敏感性、高特异性、无污染、无毒性、操作简便和样品用量少等优点。本研究以新型磁性复合微粒—金磁微粒（Fe3O4／Au微粒）为载体，建立了HBsAg检测的磁分离酶联免疫法。即将抗乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体（Anti-HBs McAb）包被于金磁微粒的表面，加入对照血清，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗乙肝病毒表面抗原多克隆抗体（Anti-HBs PcAb-HRP），37℃孵育25 min，形成双抗体夹心复合物，引入TMB底物后，复合物上的酶则催化底物显色，最后通过酶标仪检测显色液的吸光度值来检测HBsAg的浓度。通过标准HBsAg血清盘对该方法进行了验证和比较。结果表明，磁分离酶联免疫法的批内及批间相对标准偏差较小（1.20～7％）；乙肝病毒表面抗原adr，adw，ay三种亚型的最低检出浓度分别为0.5 ng／mL，0.5 ng／mL及1.0 ng／mL，其灵敏度与目前商品化ELISA试剂盒的检测结果相当；用本法对203份血样进行检测，结果与商品化ELISA试剂盒的检测结果完全一致。化学发光免疫分析法（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）具有极高的灵敏度和较宽的线性范围，将其引入到磁分离酶联免疫系统中可进一步提高方法的灵敏度。因此本实验引入Luminol-H2O2-HRP发光体系，通过对碘苯酚（PIP）对化学发光增强，建立了检测HBsAg的磁分离酶联免疫化学发光法。通过条件优化，选择HRP标记抗体的稀释度为1：1000，温育时间为25 min，以0.1 mol／L CBS缓冲液（pH 9.5）为化学发光缓冲介质，选择鲁米诺、过氧化氢及对碘苯酚的浓度分别为5×10-4 mol／L，1×10-3 mol／L和1×10-3 mol／L，建立了HBsAg的浓度与其相对发光光子数值之间的标准曲线，结果显示，线性良好，R2=0.996，线性范围为4～1100 pg／mL，检测限为8.6×10-4 ng／mL，比目前商品化试剂盒（检测限通常为0.5～1 ng／mL）的灵敏性提高了1000倍。在线性范围内选取浓度为4×10-10g／mL的HBsAg标准品，重复测定11次，其测定值的相对标准偏差（RSD）为6.8％。以上的研究工作表明以金磁微粒为载体的HBsAg免疫学检测方法具有灵敏度高，操作简单、快速，结果可靠等优点，与化学发光免疫分析法结合后还可实现对HBsAg的高灵敏度定量检测，因而在血站筛查及临床检测领域有较好的应用前景。