吡咯喹啉醌(PQQ，Pyrroloquinoline quinone)是一种氧化还原酶的辅酶，具有多种生理功能，医药保健应用前景广阔。目前已知能合成PQQ的生物只限于某些革兰氏阴性菌，其中若干种细菌的PQQ合成基因已经被得到克隆并完成测序。PQQ的生物合成途径还未阐明，但已经确定谷氨酸和酪氨酸是合成的前体物。本研究目的为筛选获得PQQ高产菌，并开展生物合成相关研究。扩增得到大肠杆菌葡萄糖脱氢酶(GDH)，利用表达载体pET28a在E. coli BL21(DE3)中实现了可溶性高效表达，对表达产物进行了纯化。以纯化的GDH为基础确定了一种PQQ的生物检测方法，并建立了一种简便高效的PQQ产生菌的筛选方法。筛选获得了一株高产菌MP606，在发酵条件未经优化及未通过诱变育种的条件下，其产量可达113mg／L。对MP606进行了发酵培养，制备得到了针状晶体，重组酶法分析、HPLC分析和特征吸收光谱分析均证实该产物为PQQ。扩增得到了MP606的16S rDNA序列并进行了分析比较，依据16S rDNA序列同源性建立了系统发育树，结果显示与多种甲基营养菌具有95％以上同源性。其中与食甲基菌属两株菌亲缘关系最近，同源性高达99％。对MP606利用几种碳源的情况进行了考察，发现甲醇和果糖是可以利用的碳源，而葡萄糖、蔗糖等则不能被利用。根据16Sr DNA分析及碳源考察结果，初步确定MP606属于食甲基菌属。对MP606进行了基因操作初步探索，确定一种革兰氏阴性菌的广普质粒pBBR1MCS-2可以通过结合转移进入MP606中，并可稳定复制。建立了特定的筛选方法以Tn5转座对MP606的pqq基因进行了诱变和筛选。已经明确大肠杆菌自身不能合成PQQ，但含有其它菌种pqq基因的质粒可使大肠杆菌产生PQQ，对大肠杆菌中可能存在的其它PQQ合成相关基因进行了初步研究，建立了Tn5转座导致PQQ合成阻断株的筛选模型。对大肠杆菌ptsI基因进行了敲除，就该类菌株作为筛选模型的可行性进行了初步探索。