黑穗石蕊次生代谢产物的分离纯化及生物活性的研究

来源 :齐鲁工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lovehlq
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地衣是共生菌与共生藻在长期的生长过程中形成的共生复合体,被认为是生物互惠共生现象中最完善的典型。黑穗石蕊Cladonia amaurocraea(Fl(?)rke)Schaer隶属于地衣类茶渍目石蕊科石蕊属,在传统医学上具有明目、安神、清热润燥、止血的功效。经大量研究表明,地衣中具有较多生物活性物质,在抗氧化、抗菌性、抗肿瘤和抗病毒等现代医学领域表现出巨大的应用潜力。为了进一步开发黑穗石蕊在现代医学领域的潜在价值,本文以黑穗石蕊为目标,对黑穗石蕊的代谢产物和次生代谢产物的生物活性和化学成分进行了系统的研究。(1)以黑穗石蕊地衣体为研究对象,采用4种不同的溶剂(冷水、热水、无水乙醇及乙醚)作为提取剂,从抗氧化活性(对ABTS自由基清除能力、对DPPH自由基清除能力和总还原能力)和抗菌活性两方面,对得到的4类浸提物的生物活性进行评价。结果表明,热水、冷水浸提物的抗氧化活性优于乙醇、乙醚提取物;而在抗菌活性上表现出相反的结果,与热水、冷水浸提物相比,乙醇、乙醚浸提物的抗菌活性较好。进一步通过化学成分系统预试实验,对4类浸提物中的化学成分进行初步分析,不同溶剂提取物含有不同的化学成分:冷水浸提物中主要含有氨基酸多肽;热水浸提物中主要含有鞣质成分;乙醇浸提物中主要含有酚性成分;乙醚浸提物中主要含有挥发性油脂。(2)采用与上述相似的实验策略,以黑穗石蕊共生菌发酵液为研究对象,用二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇提取黑穗石蕊共生菌发酵液中的活性成分,采用化学系统预试法对黑穗石蕊共生菌发酵液的化学成分进行研究。利用二氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇对黑穗石蕊共生菌发酵液的活性成分进行萃取,对所得3种萃取物及发酵液进行生物活性的评价,主要包括抗氧化活性及抑菌活性。结果表明,黑穗石蕊共生菌发酵液中含有鞣质成分、黄酮、酚性成分及挥发性油脂4种活性成分。与其他溶剂萃取物相比,乙酸乙酯萃取物在抗氧化活性和抗菌活性上均表现出更优的效果,更重要的是,其对DPPH自由基的清除能力和总还原能力均优于阳性对照组。综合分析黑穗石蕊和共生菌发酵液次生代谢产物的生物活性,在所测试的提取液中,乙酸乙酯为溶剂得到的共生菌发酵液次生代谢产物的乙酸乙酯浸提液具有最佳的生活活性,下一步将以此为研究对象,对其中的化学成分进行结构鉴定。(3)以黑穗石蕊共生菌发酵液的乙酸乙酯萃取物为研究对象,对发酵液的制备条件进行优化,在最佳的条件下,将得到的乙酸乙酯萃取物通过硅胶柱层析进行进一步的分离纯化,对所得到的6组成分的生物活性进行评价。从中选择生物活性最好的两组分,通过制备型液相分离后,结合质谱和核磁共振波谱对化合物的组成进行分析鉴定。本章以乙酸乙酯萃取物为研究对象,利用硅胶柱层析进行初步分离、对所得组别进行抗氧化活性的研究,主要包括ABTS自由基清除能力,DPPH自由基清除能力及总还原能力的研究。以活性为导向,对抗氧化活性最好的2个组别,通过制备型液相进行分离纯化,并通过质谱及核磁共振波谱分析对所得化合物进行分析鉴定。结果表明,通过初步硅胶柱层析分离得到F1、F2、F3、F4、F5、F6共6个组别。通过3种抗氧化指标的评价,表明F2、F6两组的抗氧化活性最佳。通过制备型液相进行分离纯化得5个化合物,对化合物1的结构进行分析鉴定,得化合物1分子式为C21H20O9,相对分子质量:416.1,确定为大豆苷,一种异黄酮成分。
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