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目的 观察低硒对发育期大鼠大脑皮层和海马的脂质过氧化物代谢的影响,通过对转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)含量和活性的测定,检测大脑皮层和海马神经元的功能,初步探讨低硒对NMPs的影响。 方法 利用本实验小组已建立的人工饲料喂养的三代低硒SD大鼠模型,分为对照组和低硒组。取第三代出生后21天的大鼠,雌雄不拘,经麻醉断头处死后迅速取脑,在冰上分离大脑皮层和海马组织。用硫代巴比妥酸化学法(TBARS)测定大脑皮层和海马的脂质代谢产物MDA的含量(n=20)。分别提取大脑皮层和海马的总蛋白,Western blot免疫印迹观察CREB和Ser133磷酸化CREB(p-CREB)的表达情况(n=16),进一步用免疫组化的方法在组织石蜡切片观察大脑皮层的各种类型神经元及在海马各区锥体细胞的表达(n=6)。提取大脑NMPs,经初步鉴定后,进行Western blot免疫印迹观察p-CREB的表达(n=6)。用高效毛细管电泳(HPCE)的毛细管区带电泳(CZE)模式进行NMPs的分离,观察其组成成分的改变。 结果 测定低硒组大脑皮层MDA含量明显高于对照组(对照组=0.31±0.13,低硒组的=0.66±0.10,P<0.05);海马的MDA含量低硒组明显高于对照组(对照组=0.42±0.11,低硒组=0.89±0.066,P<0.05)。提取大脑皮层和海马的总蛋白经Western blot免疫印迹检测,显示低硒组CREB与p-CREB明显低于对照组。免疫组化结果用平均灰度值表示CREB在大脑皮层(对照组=119.62±8.35,低硒组=144.67±16.67,P<0.05)和海马CA1区(对照组=123.13±6.74,低硒组=150.16±23.80,P<0.05)的表达,发现低硒组和对照组的表达均有降低。用阳汕头大学医学院硕士研究生毕业论文性细胞数表示p一CREB在大脑皮层(对照组二1 71 .89土63.062,低硒组二109.44士38.41,P(0.01)海马(对照组=28.14士9.25,低硒组=5.67士l.53P(0.05)的改变,显示低硒组较对照组均明显降低,且p一CREB在星形细胞中(对照组=巧7 .17士44 .80,低硒组=29.40士13.11,P<0.01)较胶质细胞(对照组=68.80士13.78,低硒组二51.50士14.86,P>0.05)下降明显(分别下降81.3%,25.1%)。利用高效毛细管电泳CZE分离模式能够将N卜任s分离出3一4个蛋白峰,波形较稳定,进样gmin左右有一个蛋白峰低硒组明显低于对照组。结论(1)低硒膳食能够引起发育期大鼠大脑皮层和海马的氧化代谢水平降低。 、2:CREB表达减少反映低硒能够引起大脑皮层和海马神经元功能下降,提示低硒可能导致学习记忆能力降低的潜在因素之一。(3)低硒能够引起脑NMPs的变化。