LjSAP6和LjEDS基因在百脉根中的初步功能分析

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锌指蛋白作为一种常见的调节蛋白,参与植物的生物与非生物胁迫等生理过程。百脉根中LjSAP6是一种典型的C2H2型锌指蛋白,该蛋白与AtSAP12和OsSAP17高度同源。研究表明AtSAP12响应干旱、寒冷和高盐胁迫。本论文拟以百脉根为材料,研究LjSAP6基因在豆科模式植物百脉根中的功能。研究结果如下:  1、根据基因组数据库,在百脉根基因组中找到11个LjSAP6的同源基因。通过对基因结构、氨基酸同源性以及系统进化树分析,发现LjSAP6与OsSAP17,AtSAP12进化关系最近。  2、利用pLjSAP6∷GUS转基因株系分析LjSAP6在百脉根中的表达情况。结果表明LjSAP6基因在根、叶和根瘤中均有表达。  3、在拟南芥原生质体瞬时表达LjSAP6∷YFP融合蛋白,结果表明该基因编码的蛋白定位于细胞质膜和细胞核中。用H2O2和DTT处理拟南芥原生质体,发现该蛋白在细胞内的分布状态发生变化。  4、在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中诱导表达LjSAP6,用DTT和H2O2处理,发现在H2O2处理后,蛋白的稳定性受到影响。  另外,本实验室前期研究表明内源SA及其信号影响根瘤菌的侵染。已有研究表明在植物内部免疫中,EDS1与PAD4互作可以促进ICS1表达和SA积累。在前期获得的eds1,eds2突变体基础上,本研究详细分析了这两个突变体的生长发育表型,包括地上和地下部分长度、侧根数目、根瘤数目、结瘤区间和最大瘤直径等。结果表明,与野生型相比,eds1、eds2地上部分变短、侧根数减少,表明LjEDS1和LjEDS2对百脉根的生长发育有影响。
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