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干扰素(IFN)是一种多功能的细胞因子,属于Ⅱ型细胞因子家族,在脊椎动物先天性免疫和适应性免疫中发挥着重要的作用。干扰素通过结合细胞表面受体,使JAK/STAT信号通路激活,调节下游基因表达,发挥多效性功能。本研究开展了长牡蛎中干扰素分子及其受体的克隆鉴定研究,分析了干扰素分子及其受体的基本特征,验证了干扰素的功能以及干扰素和干扰素受体的相互作用,为软体动物中研究干扰素和受体分子,以及干扰素信号通路奠定了基础。 从长牡蛎中克隆获得了类干扰素分子 CgIFNLP,cDNA全长300 b p,编码99个氨基酸,含有一个干扰素结构域,与脊椎动物同源分子相比,相似性和保守性较低,但高级结构和I I型细胞因子相似。CgIFNLP mRNA在性腺,闭壳肌,血淋巴细胞,外套膜,腮,和肝胰腺中组成型表达,且在腮中的表达量最高。在注射Poly(I:C)后,长牡蛎血淋巴细胞中 CgIFNLP mRNA表达量显著升高(p<0.05)。体外重组的CgIFNLP蛋白,能引起长牡蛎血细胞的凋亡水平及对灿烂弧菌的吞噬能力显著增加,可以显著抑制人 A549细胞的增殖。 在长牡蛎中克隆获得了类细胞因子受体,被命名为 CgIFNR-3,cDNA全长1335 bp,编码444个氨基酸,含有一个干扰素受体结构域,推测是可以和干扰素结合的功能域。CgIFNR-3 mRNA在闭壳肌,血淋巴细胞,外套膜,腮,和肝胰腺中组成型表达,且在血细胞中的表达水平最高。在注射 Poly(I:C)后3 h,长牡蛎血淋巴细胞中 CgIFNR-3 mRNA的表达水平显著升高。利用GST-pull down技术体外验证了CgIFNR-3和CgIFNLP二个蛋白的相互作用;通过报告基因活性分析,在报告基因质粒 ISRE,GAS,STAT3分别和CgIFNLP共转染 HEK293细胞后,发现 CgIFNLP可以激活干扰素信号通路中调控原件ISRE,GAS和STAT3基因的表达。 研究结果表明,在软体动物中存在干扰素分子,尽管氨基酸序列相似性低,但其生物学功能相对保守,干扰素可以结合到血淋巴细胞表面的细胞膜上,说明血细胞表面可能存在干扰素的受体,体外实验验证,可以与 CgIFNR-3结合,可以激活 JAK/STAT信号通路中关键转录调控因子的表达。研究结果为进一步研究无脊椎动物中干扰素分子的结构和功能,以及干扰素信号通路的调控机制奠定了基础。