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谷氨酰胺转胺酶(Transglutaminase,EC 2.3.2.13,简称TGase)是一种催化酰基发生转移反应的酶,通过催化反应,蛋白质分子之间或之内形成ε—(γ-谷胺酰)赖氨酸键,使各种蛋白质分子内或分子间、蛋白质和氨基酸之间连接,改变蛋白质的结构和功能性质。谷氨酰胺转胺酶按来源分为动物来源的。TGase、植物来源的TGase和微生物来源的TGase,该酶不仅在生物体内担任重要的生理功能,而且在食品生产加工、化妆品和医药等领域都有着较为广泛的应用。
本文根据已报道的茂原链霉菌(Streptomyces mobaraens)的基因序列,设计引物,以实验室保藏的一株茂原链霉菌基因组DNA为模板,利用PCR的方法获得谷氨酰胺转胺酶(MTG)基因。序列分析结果表明,该片段全长1128bp,编码376aa,分子量为42kD左右。将MTG基因插入pMBP—C表达载体,转化Ecoli TOP10F菌株进行诱导表达。SDS—PAGE扫描结果显示不同的诱导和培养条件下,谷氨酰胺转胺酶基因都没有在Ecoli TOP10F菌株中得到表达。文中分析了MTG基因未获得表达的原因,并为下一步的实验提出了解决方法。
本文还采用生物信息学分析方法,利用Swiss—Prot和EMBL数据库中的谷氨酰胺转胺酶蛋白序列、基因序列数据,研究了谷氨酰胺转胺酶的分子进化规律以及蛋白质序列变化与其功能分化的关系,结果表明不同来源的谷氨酰胺转胺酶在进化的过程中,横向进化占有较大的比重,且存在明显的定向选择作用。其中脊椎动物体内发现的九种谷氨酰胺转胺酶,在脊椎动物产生分化之前就已经产生功能上的分化。这些结果为蛋白质功能机制研究及蛋白质分子设计提供重要的参考。