角鲨烯环氧化酶对胶红酵母生长及抗逆性的影响

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背景:胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)是引起真菌病和甲真菌病等多种疾病的机会致病菌。抗真菌药物萘替芬为角鲨烯环氧化酶的抑制剂,可抑制麦角甾醇的合成途径,引起角鲨烯累积而致真菌死亡。研究发现,萘替芬可逆地抑制胶红酵母的色素生成。本研究利用萘替芬处理胶红酵母,通过巨噬细胞吞噬实验评估胶红酵母的生长及不同条件下的存活率的影响。目的:观察角鲨烯环氧化酶对胶红酵母的生长及不同条件下的存活率的影响。方法:运用形态和分子生物学方法鉴定胶红酵母,并测试抗真菌药物萘替芬可逆性脱色胶红酵母的效果。利用细胞吞噬实验,检测小鼠巨噬细胞(RAW264.7)吞噬胶红酵母的性能,并检测在不同处理条件下胶红酵母在RAW264.7中的存活率。分子克隆胶红酵母角鲨烯环氧化酶(SQLE)基因(Erg1),并利用毕赤酵母表达系统检测其表达。结果:1.分离鉴定了一株胶红酵母,在最低浓度(0.2mg/mL)下,萘替芬可作为胶红酵母的可逆抑制剂。2.萘替芬诱导胶红酵母脱色,脱色的胶红酵母会更容易被吞噬细胞吞噬,且其抵抗力下降。3.萘替芬诱导脱色的胶红酵母对1%SDS、1.5M NaCl和0.5%刚果红等的抵抗力下降。4.重组基因Erg1-pPIC9K被成功构建并克隆成大肠杆菌(JM190)和P.Pastoris(GS115)细胞。结论:SQLE影响了胶红酵母对热、刚果红、甲基蓝、SDS、NaCl、KCl等压力的抵抗力。
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