背景和目的:鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)是原发于鼻咽粘膜上皮的恶性肿瘤,是我国发病率最高的十大恶性肿瘤之一,也是最常见的头颈部肿瘤。NPC发病隐匿,发现时常常已有颈部淋巴结和远处转移,因此,鼻咽癌转移机制及控制转移是目前鼻咽癌研究的重大课题,同时为进一步揭开鼻咽癌转移的分子机制提供理论和实验依据。蛋白质组学技术具有高通量、高灵敏的特点,实时、阶段表达蛋白的差异分析,为筛选和鉴定肿瘤生物学标志物提供可靠的技术。本研究有可能为阐明鼻咽癌转移机制及寻找预测鼻咽癌转移的标志物提供理论依据。方法:体外培养人鼻咽癌细胞株CNE1(高分化鳞癌细胞)和CNE2(低分化鳞癌细胞),细胞培养至对数生长期,抽取细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳(2-DE)分离人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2总蛋白,考染显色,Image Master5.0图像分析系统分析,从胶中选取分离的差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),Mascot软件搜索NCBInr数据库鉴定差异蛋白质,筛选并初步鉴定出与鼻咽癌转移相关的蛋白质。而后,把筛选出的差异蛋白质丙酮酸激酶作为靶蛋白,利用细胞免疫组化验证丙酮酸激酶在两种细胞株的表达情况。结果:经双向凝胶电泳分离细胞总蛋白后,采用质谱技术鉴定和生物信息学分析得出六个蛋白,在CNE1细胞株中特异性表达的蛋白质:丙酮酸激酶、β肌动蛋白和20s蛋白酶体。在CNE2细胞株特异性表达的蛋白质:腺嘌呤磷酸核糖转移酶、蛋白酶β-6亚基和血小板活化因子乙酰水解酶。在上述差异表达的蛋白质中,发现部分蛋白质参与细胞运动、细胞骨架、信号转导、细胞凋亡、能量代谢等,提示鼻咽癌转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果。再通过细胞免疫组化的方法从蛋白水平上验证了丙酮酸激酶,试验结果显示:在细胞株CNE1中呈弥漫性强阳性表达,而在细胞株CNE2中呈局灶性阳性表达。结论:1.蛋白质组学技术是快速、有效筛选鼻咽癌转移相关蛋白的理想方法。本课题应用双向凝胶电泳技术,获得了分辨率高、重复性较好的人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2蛋白质表达图谱。2.人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2具有明显的差异表达蛋白质图谱,本研究共分离鉴定出可能与鼻咽癌转移相关的6种差异蛋白,分别是:丙酮酸激酶、β肌动蛋白、20s蛋白酶体、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、蛋白酶β-6亚基和血小板活化因子乙酰水解酶。3.利用细胞免疫组化的方法对差异蛋白中的丙酮酸激酶进一步验证,研究结果显示:丙酮酸激酶在人鼻咽癌细胞株CNE1的表达水平强于人鼻咽癌细胞株CNE2,验证结果与质谱鉴定结果相一致。4.本实验结果可望为鼻咽癌转移标志物的筛选提供依据。