【摘 要】
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七鳃鳗是古脊椎动物界翘楚之一,在生物进化的研究上占有重要的地位。已有研究表明七鳃鳗体内存在一套独特的免疫系统,这套免疫系统利用细胞表面的亮氨酸重复序列组成可变淋巴细胞受体（VLR）对抗原做出免疫应答。已知VLR杀伤细菌类抗原,但癌细胞是否能引起VLR介导的杀伤仍是未知。本实验室首次在七鳃鳗体内发现一种选择性杀伤癌细胞的免疫蛋白,并命名为七鳃鳗免疫蛋白（Lamprey Immune Protein,
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七鳃鳗是古脊椎动物界翘楚之一,在生物进化的研究上占有重要的地位。已有研究表明七鳃鳗体内存在一套独特的免疫系统,这套免疫系统利用细胞表面的亮氨酸重复序列组成可变淋巴细胞受体（VLR）对抗原做出免疫应答。已知VLR杀伤细菌类抗原,但癌细胞是否能引起VLR介导的杀伤仍是未知。本实验室首次在七鳃鳗体内发现一种选择性杀伤癌细胞的免疫蛋白,并命名为七鳃鳗免疫蛋白（Lamprey Immune Protein,LIP）。天然LIP蛋白（n LIP）纯化难度大、产量低,因此本论文中所用LIP蛋白均为大肠杆菌表达的重组LIP蛋白（rLIP）。1μg/ml的rLIP蛋白快速破坏癌细胞的细胞形态,如贴壁癌细胞空泡化、悬浮癌细胞膨胀等;但同样剂量的rLIP蛋白却不能引起正常细胞形态的改变,说明在此剂量下rLIP蛋白是一种选择性杀伤肿瘤细胞的毒性蛋白。人乳腺癌细胞MCF-7对rLIP蛋白十分敏感,室温下,1μg/ml的rLIP蛋白在数分钟内聚集到MCF-7细胞膜上,对细胞的细胞膜、细胞骨架、线粒体和内质网进行破坏,最终使细胞以坏死样方式死亡。本文构建了背部长有MCF-7细胞肿瘤的裸鼠,用于研究在组织水平以及动物水平上rLIP蛋白对乳腺癌细胞的作用。将离体的小鼠MCF-7细胞瘤浸泡到rLIP蛋白溶液中,发现大量的肿瘤细胞死亡,此过程rLIP蛋白聚到癌细胞表面或进到细胞内部引起细胞膜破裂、细胞内容物外泄、DNA降解。在小鼠MCF-7细胞瘤处直接注射20μg rLIP蛋白使小鼠肿瘤细胞坏死,肿瘤组织明显缩小,但是对小鼠正常组织细胞没有明显的副作用。无颌脊椎类动物中发现的VLR免疫机制揭示了约4亿年前古脊椎动物就已进化出适应性免疫体系;本实验室首次在七鳃鳗体内发现具有细胞毒性的免疫分子LIP蛋白,为研究七鳃鳗抗肿瘤机制与适应性免疫系统的起源与进化提供了新思路。
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