【摘 要】
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近年来,研究发现角蛋白、角蛋白关联蛋白及骨形态发生蛋白的基因参与哺乳动物毛囊发育周期和毛发生长过程,目前只研究了其中一类基因与毛囊生长发育间的相关性,而这三类基因间相互作用关系如何,与信号通路存在怎样的关系还尚不明确。有报道称,DCN、激素（褪黑激素,MT）、蛋白（FGF-5、IGF-1）参与调控毛囊发育周期,但激素、蛋白对DCN基因作用如何,它们在细胞信号通路之间关系如何也尚不明确。本文旨在研究
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近年来,研究发现角蛋白、角蛋白关联蛋白及骨形态发生蛋白的基因参与哺乳动物毛囊发育周期和毛发生长过程,目前只研究了其中一类基因与毛囊生长发育间的相关性,而这三类基因间相互作用关系如何,与信号通路存在怎样的关系还尚不明确。有报道称,DCN、激素（褪黑激素,MT）、蛋白（FGF-5、IGF-1）参与调控毛囊发育周期,但激素、蛋白对DCN基因作用如何,它们在细胞信号通路之间关系如何也尚不明确。本文旨在研究与毛囊生长相关的角蛋白基因K26、角蛋白关联蛋白KAP26.1及核心蛋白聚糖DCN基因在哺乳动物皮肤成纤维细胞中表达,以及探讨基因通过信号通路影响毛发生长的机制,为毛发生长发育提供新的研究思路,为未来治疗人类头发相关疾病及经济哺乳动物毛发生长方面奠定基础。本文的研究分为两部分。第一部分利用慢病毒介导技术,构建小鼠K26和KAP26.1过表达载体,目的载体包装成病毒感染小鼠成纤维细胞,并通过q PCR技术检测KAP6.2,KAP7.1、KAP8.1、KAP11.1、BMP-4、BMPR-IB基因的表达量;第二部分利用MT、FGF-5、IGF-1分别对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞作用,根据它们对DCN基因作用影响,设计协同实验,研究蛋白和激素协同作用对DCN基因表达的影响。实验结果:（1）K26基因过表达,上调细胞内KAP26.1和BMP4基因的表达,下调KAP6.2、KAP7.1、KAP8.1、KAP11.1、BMPR-IB基因的表达。而KAP26.1基因过表达,对BMP4、BMPR-IB和KAP26.1基因起到上调作用,对KAP6.2、KAP7.1、KAP8.1、KAP11.1基因起到下调作用。（2）MT处理绒山羊皮肤成纤维细胞表明,低浓度MT促进DCN基因表达,高浓度MT抑制DCN基因表达。FGF5处理皮肤细胞表明,FGF-5浓度越高,处理时间越长,对DCN基因上调作用越明显。IGF-1处理细胞表明,IGF-1明显抑制细胞内的DCN基因表达。0.02 g/L MT与10-4 g/L FGF5协同处理皮肤细胞72 h,细胞内DCN基因表达明显下调。0.02 g/L MT与10-5 g/L IGF-1协同处理皮肤细胞24 h和72 h,细胞内DCN基因表达明显下调。结论:（1）通过K26和KAP26.1的数据分析,首先,发现K26在细胞内正调控KAP26.1的表达;KAP26.1正调控K26的表达;说明两个基因在细胞内是协同关系。其次,K26和KAP26.1对KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1基因产生负调控作用,说明K26和KAP26.1下调四个基因表达,增粗小鼠鼠毛直径。最后,K26和KAP26.1对BMP-4基因起到正调控作用,说明K26和KAP26.1正调控BMP信号促进小鼠毛囊发育向退行期转换。不同的是,K26和KAP26.1对BMPR-IB基因的表达产生相反的作用,直接影响细胞中BMP信号通路,对小鼠鼠毛生长周期产生不同作用。综上所述,K26和KAP26.1位于六个基因的上游,参与BMP细胞信号通路、调控小鼠毛囊发育周期和鼠毛品质。（2）FGF-5和低浓度的MT促进细胞内DCN基因高表达,DCN表达量升高抑制下游的TGF-β细胞信号通路,进而调控毛囊发育从休止期向生长期转换;相反,IGF-1与MT协同、FGF-5和MT协同、高浓度MT、IGF-1下调DCN基因表达,增强TGF-β细胞信号,使山羊羊绒生长停留在休止期。综上所述,MT和蛋白（FGF-5、IGF-1）通过调节DCN基因表达影响羊毛生长周期,对调控山羊绒毛生长具有重要意义。
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