论文部分内容阅读
针对细菌耐药性问题医学界虽然积极地采取了各种应对措施,但这种现象仍在不断增剧,因而如何缓解这一现象成为了全球范围内广泛关注的热点。但是开发新型具有抗菌活性的化学合成药物难度较大、周期相对较长,因此,越来越多的科研工作者把更多的目光和注意力投入到我国拥有几近千年发展历史的珍贵瑰宝中草药制剂上。目的:通过深入研究硒化甘草多糖（Selenzing Glycyrrhiza Uralensis Fisch Polysacccharide,SeGUP）的抗菌活性和其联合抗菌制剂的抑菌作用及其免疫调节作用,为寻求一种可以减缓细菌耐药性的方法和制备抗菌活性物质产生的途径和手段提供新的方向,为将具有疆域特色药用动植物研制成安全、有效抗菌制剂提供理论依据。方法:（1）体外抑菌试验:首先采用滤纸片法测定SeGUP的抑菌圈,其次使用二倍稀释法测定SeGUP联合头孢噻呋钠对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）、大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）的最小抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration,MIC）,筛选出对SeGUP更为敏感的细菌,并测定对该细菌的细胞膜、细胞壁、培养液中蛋白浓度、该菌生长曲线的影响,以及与抗菌药物联合使用后的分级抑菌浓度（Fractional Inhibitory Concentration Index,FICI）,进而评价SeGUP及其联合抗菌药物的体外抗菌效果。（2）体内抗菌试验:通过体外抑菌试验,选用更为敏感的细菌,建立以该菌菌液感染小鼠的模型,从而确定由该种菌导致的小鼠全部死亡的最低致死剂量(MinimumLethal Dose,MLD100),并在此基础上,将SeGUP预先灌服于所有感染菌液的小鼠以评价其预防作用;选用SeGUP的最优治疗剂量联合不同剂量的抗菌药物来检测SeGUP联合抗菌药物在体内对感染小鼠的治疗效果,采集病变组织制成石蜡切片后用HE染色法,评价SeGUP及其他联合抗菌药物在体内的抗菌作用。（3）免疫功能试验:使用环磷酰胺建立小鼠的免疫抑制模型,给予高、中、低剂量的SeGUP后采集血清样品,采用ELISA方法检测血清中Ig A、Ig G、Ig M、AST、ALT、BUN、AKP含量及小鼠血清中相关细胞因子IL-1、IL-2含量,评价SeGUP的免疫效果。结果:（1）体外抑菌结果显示,SeGUP对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均具有体外抗菌作用,其高、中、低剂量SeGUP对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小分别为12.9±0.2 mm,11.0±0.2 mm,9.9±0.2mm,对大肠杆菌的抑菌圈大小分别为10.9±0.2 cm,10.0±0.2 mm,9.0±0.2 mm;其MIC值分别为100、200 mg/mL;在抗菌药物中,头孢噻呋钠、硫酸卡那霉素及恩诺沙星的抑菌效果均表现较好,其抑菌圈对金黄色葡萄球菌大小分别为:22.9±0.2 mm,25.2±0.2 mm,21.9±0.2 mm,其MIC值分别为128μg/mL,125μg/mL,125μg/mL;大肠杆菌抑菌圈大小分别:20.0±0.2 mm,24.9±0.1 mm,10.0±0.2 mm,其MIC值分别为128μg/mL,125μg/mL,250μg/mL;因此,选用菌株金黄色葡萄球菌进行后期试验;SeGUP对金黄色葡萄球菌的细胞膜、细胞壁、蛋白浓度及24 h生长曲线均表现为不同程度的促进作用,并且随着剂量的增加其效果越好;并将抑菌作用较好的抗菌药物与不同MIC的SeGUP分别联合用药后,其FICI值分别为0.75,1,1.5;判定结果分别为:头孢噻呋钠与硫酸卡那霉素均表现较好的相加作用,而恩诺沙星则表现为无关作用。（2）体内抗菌试验结果显示,SeGUP对染菌小鼠肺部在预防作用和治疗作用均表现有一定的效果,但预防效果相对较弱,SeGUP高剂量组250 mg/kg小鼠为最佳用药剂量组;当其与头孢噻呋钠联合用药后,头孢噻呋钠1.5 mg/kg为最佳治疗效果,能减轻头孢噻呋钠原有的剂量（3 mg/kg）,并相对头孢噻呋钠单独用药效果较好。（3）免疫试验结果表明,不同剂量的SeGUP均可促进小鼠血清中Ig G、Ig A、Ig M、IL-1和IL-2的含量;其中,高、中剂量组的SeGUP对以上相关免疫指标的提高作用较空白对照组小鼠差异显著（P<0.05）,与免疫抑制组相比表现为差异极显著（P<0.01）,而在小鼠血液中相关生化指标的测定中显示,AST、ALT、BUN、AKP含量SeGUP各剂量组较空白对照组均无显著性差异（P>0.05）。结论:SeGUP在体内、外试验中均表现有一定的抗菌作用,其对染菌小鼠的治疗作用较强于预防作用,SeGUP联合头孢噻呋使用后不仅能够提高头孢噻呋钠的抗菌能力而且也能够减少头孢噻呋钠原有使用剂量;使用SeGUP后与空白对照组中小鼠的肝肾指标相比无明显差异性变化,因此,初步表明SeGUP对健康小鼠的肝、肾脏功能无明显损害作用,也较为安全,为后续的开发应用提供一定的可能性;SeGUP的抗菌作用与其对细菌细胞膜、细胞壁及蛋白浓度作用有关,也可能与其能提高小鼠血清中的某些相关的免疫因子的含量使其免疫力增强有关。