【摘 要】
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裂解性多糖单加氧酶(Lytic polysaccharide monooxygenases,LPMOs)是一类纤维素降解辅助性酶类,在纤维二糖脱氢酶(Cellobiose dehydrogenase,CDH)等电子供体的辅助下,可使多
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裂解性多糖单加氧酶(Lytic polysaccharide monooxygenases,LPMOs)是一类纤维素降解辅助性酶类,在纤维二糖脱氢酶(Cellobiose dehydrogenase,CDH)等电子供体的辅助下,可使多糖链断裂,提高传统纤维素酶的水解效果。本研究将粗糙链孢霉中两个从未报道过LPMO基因和CDH基因转入毕赤酵母中,研究了重组LPMO-00760、LPMO-00836和CDH的酶学特性,以及它们促进商业化纤维素酶水解作用的效果。经测序、Western Blot和特异性底物活性电泳验证,本研究在毕赤酵母中成功表达了粗糙链孢霉的LPMO-00760、LPMO-00836和CDH基因。重组LPMO-07760与LPMO-00836蛋白粗提液酶活力分别为13.74 U/和7.85 U/g;最适温度分别为35℃与40℃;最适pH分别为7.5与8.0;锰离子和铜离子能提高其酶活性。重组CDH的酶活为250 U/L;在30-40℃之间热稳定性最好,最适pH为5.5。重组LPMO能有效促进商业化纤维素酶Celluclast 1.5L的作用。以微晶纤维素为底物,与单独使用Celluclast 1.5L相比,添加重组LPMO-07760或LPMO-00836后,葡萄糖产量分别提高了5.58和5.83倍。以抗坏血酸或重组CDH为电子供体时,与单纯商业化纤维素酶相比,添加LPMO-07760后,茭白秸秆水解转化率分别提高19%和19.8%;添加LPMO-00836后,水解转化率分别提高15.6%和20%。重组CDH作为电子供体效果比抗坏血酸更好。
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