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目的原发性肝癌(primary hepatic carcinoma, PHC)是一类发生率和死亡率均很高的疾病,严重威胁着人类健康。大多数肝癌患者都与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染有关。合并有HBV感染的肝硬化,尤其是伴随异型增生结节出现者,其发展为肝癌的几率高,被视为肝癌前病变。虽然近几十年PHC的治疗方法得到了一定发展和完善,但其临床疗效仍未得到明显的提高。阻止或延缓肝癌前病变的发生发展,预防肝癌疾病的发生,就显得具有非常重要的现实意义。本课题在导师前期的临床及实验的工作基础之上,针对肝癌前病变(乙型肝炎肝硬化腹水(肝内结节>1cm))患者的中医证型做初步研究,并从肝细胞生长因子(hepatic growth factor, HGF)及其受体(c-Met)与α平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,α-SMA)之间的相互关系去探讨抗纤抑癌方防治肝癌前病变的作用机制。方法1临床研究广泛查阅相关文献,收集乙型肝炎肝硬化腹水的中医症状,建立临床流调问卷条目池,咨询相关专家并根据相关标准,确定所需调查的中医症状条目池以及相应的症状分级量化标准,最终形成中医证候临床调查问卷表。按统一问卷表收集乙型肝炎肝硬化腹水(肝内结节>1cm)患者的临床证候资料,应用无监督的因子分析方法研究其证候特点,并对所得出的证型与临床指标之间的相关性进行初步探讨。2实验研究建立二乙基亚硝胺(diethylnirtosamine, DEN)诱导的大鼠肝癌前病变动物模型,采用抗纤抑癌方进行干预,并分别以复方鳖甲软肝片、秋水仙碱片作为对照,比较各组大鼠在一般情况及肝脏组织病理形态的情况,并应用免疫组化、酶联免疫及实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, RQ-PCR)等方法检测各组大鼠肝脏的胎盘型谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-transferases-π, GST-Pi)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA).甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)、AFP-L3、α-SMA、HGF及c-Met等方面指标的情况。结果1临床研究对所收集到的134例乙型肝炎肝硬化腹水(肝内结节>1cm)患者的临床资料进行频数分析得出,乙型肝炎肝硬化腹水(肝内结节>lcm)发病年龄高峰在51～60岁,肝硬化病史在5年以内所占比例为67.16%,出现腹水的病史在5年以内的比例达85.07%,62.69%的患者ALB低于正常值,右侧卧位腹水深度以<3cm出现的频率最高,达到35.82%。对所收集到的临床症状通过无监督的因子分析得出,乙型肝炎肝硬化腹水(肝内结节>1cm)患者的证候可归纳为肝胆湿热兼脾虚、肝郁脾虚兼水湿内蕴、气郁化火兼血瘀、气虚血瘀、痰瘀互结、气滞湿阻、肝郁气滞、湿邪困脾、脾虚失运和肝肾亏虚兼瘀血内阻这十个证型。经与临床资料做相关分析得出,各证型与患者是否抗病毒治疗、PT及WBC有相关性。2实验研究在大鼠的一般情况上,模型组大鼠在予DEN灌胃第3周以后开始出现一些相关的病态表现,各治疗组大鼠也有类似表现,但程度较模型组轻。第12周后除正常组之外的各组开始陆续出现死亡。至实验结束,模型组共死亡6只,抗纤抑癌组死亡2只(其中1只是因第2周时给药不慎致死),鳖甲软肝组死亡4只,秋水仙碱组死亡4只,抗纤抑癌组死亡率最低。在大鼠肝脏的大体形态上,模型组大鼠肝脏颜色暗红,无光泽,表面凹凸不平,可见弥漫性再生结节形成；抗纤抑癌组大鼠肝脏表面相对光滑、平整,结节较少、较小；鳖甲软肝脏及秋水仙碱组大鼠肝脏的表现介于模型组和抗纤抑癌组之间。经HE染色显示,模型组大鼠肝索排列紊乱,在门脉区有大量的结缔组织增生,胶原纤维增生明显,广泛假小叶形成,可见大量肝细胞异型增生灶及异型增生结节,肝细胞大小不等,核仁明显,细胞核具有多形性。与模型组相比,抗纤抑癌组在肝细胞变性坏死、结缔组织增生程度及肝细胞异型增生灶和异型增生结节数目上均较轻；而鳖甲软肝组、秋水仙碱组大鼠的情况介于两者之间。Masson染色显示各组大鼠肝纤维化的情况与HE类似,而胶原纤维着色更为明显。免疫组化结果显示,与模型组相比,抗纤抑癌组能明显减少GST-Pi阳性灶数及其面积,同时也降低了PCNA阳性细胞标记指数及α-SMA表达量,有统计学差异(P<0.01)；抗纤抑癌组与秋水仙碱组相比较,在GST-Pi阳性灶数、PCNA阳性细胞标记指数及α-SMA表达量具有显著性差异(P<0.05),抗纤抑癌组优于秋水仙碱组；抗纤抑癌组与鳖甲软肝组比较均无显著性差异(P>0.05)。酶联免疫结果显示,与模型组相比,抗纤抑癌组在AFP和AFP-L3的表达量上均有明显降低,有统计学差异(P<0.05及P<0.01),在AFP-L3与AFP的比值上亦较模型组表达低,但没有统计学差异(P>0.05)；抗纤抑癌组与秋水仙碱组相比较,在AFP-L3的表达量上有显著性差异(P<0.05)；抗纤抑癌组与鳖甲软肝组比较均无显著性差异(P>0.05)。RQ-PCR结果显示,HGF mRNA的相对表达量抗纤抑癌组与模型组比较有统计学差异(P<0.05),与秋水仙碱组比较亦有统计学差异(P<0.05),抗纤抑癌方能显著提高肝癌前病变大鼠HGF mRNA的表达水平。c-Met mRNA在DEN造模的各组中均低表达,各组间无统计学差异(P>0.05)。结论肝癌前病变(乙型肝炎肝硬化腹水(肝内结节>1cm))患者的中医证型可初步归纳为肝胆湿热兼脾虚、肝郁脾虚兼水湿内蕴、气郁化火兼血瘀、气虚血瘀、痰瘀互结、气滞湿阻、肝郁气滞、湿邪困脾、脾虚失运和肝肾亏虚兼瘀血内阻这十个证型。各证型与患者是否抗病毒治疗、PT及WBC有相关性。抗纤抑癌方能够改善肝癌前病变大鼠的相关指标,有一定抗纤维化、延缓肝癌前病变的作用,其作用机制是通过上调HGF mRNA的表达,抑制肝星形细胞(hepatic stellate cell, HSC)活化,促进细胞外基质(extracelluar matrix, ECM)降解,而起到相应作用。