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原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一。尽管临床诊断水平及外科技术不断提高,但由于肝癌具有高的侵袭转移能力,肝切除后发生复发转移率高,致使肝癌的整体治疗水平并未取得显著改善,肝癌病人的5年生存率至今仍无显著提高。大量的资料显示肝癌术后的主要死因是复发转移。因此,深入研究肝癌复发转移的分子机制,探索防治肝癌复发转移的手段,对进一步提高肝癌整体治疗水平具有重要意义。Ets变异体2(ets variant2, ETV2)又称ER71/Etsrp,是Ets家族PEA3亚家族成员之一。最早是在斑马鱼胚胎中被发现,后期研究发现ETV2广泛表达于哺乳动物胚胎中。在斑马鱼胚胎敲除ETV2导致胚胎无法形成有功能的血管。ETV2-/-小鼠卵黄囊无法形成血管结构。ETV2-/-胚胎鼠因血管缺失无法生长发育而死亡。鉴于血管生成是影响HCC复发转移的一个关键因素,提示ETV2可能在肝癌复发转移过程中发挥了十分重要的作用。本课题旨在研究ETV2在肝癌细胞系和肝癌组织样本中的表达情况,分析ETV2与肝癌临床病理特征的相关性,并结合病例随访资料探讨ETV2表达与肝癌预后的关系。我们的研究结果显示：1、ETV2mRNA和蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)组织和肝癌细胞系中均呈低表达：我们采用实时定量Real-time PCR技术检测了30例肝癌组织(HCC)及其相应的邻近非癌肝组织(Adjacent Non-tumorous Liver Tissue,ANLT)中的ETV2mRNA表达水平。随后,我们又采用半定量RT-PCR检测了同一批组织标本HCC和ANLT中的ETV2mRNA表达水平。同时检测了正常肝细胞系LO2及四种肝癌细胞系HepG2、 SMMC-7721、MHCC97-L、HCCLM3中ETV2mRNA的表达水平。Real-time PCR结果显示,与邻近非癌肝组织(ANLT)比较,ETV2在肝癌组织(HCC)中呈显著低表达(0.485±0.01,P<0.05)。将正常肝细胞系LO2中ETV2mRNA表达量设为1,结果显示SMMC7721、HepG2、MHCC97-L和HCCLM3细胞系中ETV2mRNA的相对表达量分别为0.03±0.01、0.065±0.02、0.06±0.016、0.01±0.007,差异有统计学意义(任意一组肝癌细胞系和LO2之间P<0.05),表明ETV2在肝癌细胞系中呈显著低表达。进一步用Western-blot检测同一批组织标本HCC和ANLT中ETV2蛋白表达水平,结果显示,ETV2蛋白在肝癌组织(HCC)中的表达水平显著低于邻近非癌肝组织(ANLT)(0.12±0.02vs.0.96±0.13, P<0.05)。用Western-blot检测正常肝细胞系LO2和肝癌细胞系SMMC7721、 HepG2、MHCC97-L及HCCLM3中ETV2蛋白表达水平,以正常肝细胞系LO2作对照。结果显示在上述肝癌细胞系的蛋白表达水平分别为0.26±0.02、0.36±0.04、0.30±0.03、0.21±0.02,差异均有统计学意义(任意一组肝癌细胞系和LO2之间P<0.05),表明肝癌细胞系中ETV2蛋白表达水平显著低于正常肝细胞系。2、ETV2低表达与肝癌临床病理特征及生存预后密切相关为了研究ETV2表达水平与肝癌临床病理特征及生存预后的关系,我们采用免疫组化法检测99例肝癌组织标本中ETV2的表达水平。根据免疫组化检测结果,我们将99例肝癌患者分为ETV2高表达组(56例)与低表达组(43例),分析ETV2表达水平与肝癌临床病理特征和预后的关联。结果显示,ETV2表达水平与肿瘤结节数目(P=0.001)、有无包膜（P=0.001)、有无静脉浸润(P=0.001)、巴塞罗那分期(P=0.008)及Edmondson-Steiner分级(P=0.001)密切相关。生存结果分析显示,ETV2低表达组中位总体生存时间为18.0月,高表达组为48.0月；ETV2低表达组中位无瘤生存时间为15.1月,高表达组为40.0月。表明ETV2低表达组的总体生存时间和无瘤生存时间均显著低于ETV2高表达组(P<0.001)。与此同时,为了分析不同肝癌类型对肝细胞癌生存率的影响,我们又作进一步作分层研究。将99例肝癌分为SHCC(小肝癌)、SLHCC(孤立性大肝癌)和NHCC (结节性肝癌)三个亚组,分析比较三个亚组的总体生存时间和无瘤生存时间的差异。结果显示,SLHCC、SHCC和NHCC组的中位总体生存时间分别为为42.0月,40.0月和12.0月；SLHCC、 SHCC和NHCC组的中位无瘤生存时间分别为41.0月,39.0月和10.0月,经统计学分析显示：SHCC组和SLHCC组总体生存时间和无瘤生存时间均显著高于NHCC组(P=0.001)；而SHCC组和SLHCC组的总体生存时间(P=0.633)和无瘤生存时间(P=0.423)则无明显差异。继之,我们采用Cox风险回归模型对肝癌患者的临床特征和ETV2表达水平进行单因素分析和多因素分析。单因素分析显示肿瘤结节数目(P=0.001)、有无包膜(P=0.001)、静脉浸润(P=0.001),巴塞罗那分期(P=0.001)、Edmondson-Steiner分级(P=0.015)、ETV2表达水平(P=0.001)是影响肝癌患者预后的危险因素；进一步多因素分析显示肿瘤结节数目(P=0.026)、静脉浸润(P=0.006)及ETV2表达水平(P=0.021)是影响肝癌患者预后的独立危险因素。根据以上研究结果我们得出以下结论：ETV2在肝癌组织及肝癌细胞系中呈一致性的显著低表达。ETV2的表达水平、肿瘤结节数目、有无静脉浸润与肝癌的生存预后密切相关,是肝癌预后的独立危险因素。