α-Syn寡聚体对神经元膜表面NMDAR影响的研究

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目的:探讨α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)寡聚体对神经元细胞活力的影响及进一步研究α-Syn寡聚体对神经元膜表面N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptors,NMDAR)的影响。方法:在严格的无菌条件下解剖24 h内健康出生的新生SD大鼠大脑皮质并提取原代神经元进行培养,PAGE凝胶蛋白微量回收法制备α-Syn寡聚体并通过细胞外添加α-Syn寡聚体孵育神经元,通过CCK-8法测定α-Syn寡聚体对神经元毒性作用,细胞免疫荧光实验、Western Blot实验检测细胞外α-Syn寡聚体是否能够进入神经元及对神经元膜表面NMDAR的影响。结果:1.Western Blot实验结果提示α-Syn寡聚体制备成功。2.CCK-8法检测实验结果提示在添加了α-Syn寡聚体的实验组相对于未添加α-Syn寡聚体的对照组,神经元的细胞活力降低。3.Western Blot实验结果及细胞免疫荧光实验结果均提示在添加了α-Syn寡聚体的实验组(α-Syn 1组,α-Syn 2组)相对于未添加α-Syn寡聚体的对照组(Control组)神经元内α-Syn寡聚体增多,且α-Syn2组(添加α-Syn寡聚体2μg/ml)相对于α-Syn 1组(添加α-Syn寡聚体1μg/ml)α-Syn寡聚体更多的进入神经元。4.Western Blot及细胞免疫荧光实验结果均提示实验组相比于对照组神经元内α-Syn寡聚体增多;NR1在神经元膜蛋白中减少,在神经元胞浆蛋白中增多,在神经元总蛋白中不变,且α-Syn 2组(添加α-Syn寡聚体2μg/ml)相对于α-Syn1组(添加α-Syn寡聚体1μg/ml)NMDAR改变更为显著。结论:1.细胞外添加α-Syn寡聚体孵育神经元能够降低神经元的细胞活力。2.α-Syn寡聚体能够进入神经元。3.α-Syn寡聚体进入神经元后,能够影响神经元膜表面的NMDAR,促进神经元膜表面NMDAR内在化。
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