抑制产呕吐毒素禾谷镰刀菌菌株筛选及抑菌上清液特性研究

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[目的]禾谷镰刀菌是导致小麦赤霉病的主要病原菌,也是粮食储存和粮食生产中的主要有害微生物。禾谷镰刀菌的繁殖速度迅速导致的疾病不仅降低了粮食产量,而且还产生了诸如脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)等毒素,对动物健康造成严重危害。抑制镰刀菌的生长和繁殖是减少小麦赤霉病和毒素形成的基本前提。利用生物拮抗来控制小麦赤霉病对提高饲料生产质量和动物安全具有重要意义。[方法]试验一:从实验室保存的菌种中筛选出2株禾谷镰刀菌拮抗菌株,经过抑菌试验,B10菌株的抑菌效果最为理想,随后对B10菌株进行生理生化指标测定、形态学观察、以及16SrDNA结合gyrB基因序列分析,B10号菌株初步鉴定为芽孢杆菌属中的解淀粉芽孢杆菌。试验二:通过对发酵培养基、发酵温度、发酵时间、培养基初始pH以及摇床转速的单因素分析以及以发酵时间、摇床转速、发酵温度和培养基初始pH为四因素进行的正交试验分析,B10菌株产抑菌物质发酵的最佳组合为发酵时间72h,发酵温度37℃,摇床转速200r/min,培养基初始pH8.0。试验三:通过发酵液对热、对酸碱度的耐受性试验,发现发酵液中该发酵物质对高温具有稳定性,在碱性条件下抑菌活性也不受到影响,对蛋白酶处理也不是很明显,这一特点与脂肽类物质特别相似。试验四:观察上清液对禾谷镰刀菌产DON相关基因的表达量变化,发现Tri3、Tri4、Tri5、Tri6基因的表达量均呈明显下降趋势。而与产毒相关的Tri101基因在200μL和400μL处理组的的表达量变化呈上升趋势,但后又趋于降低,通过查阅文献,Tri6、Tri10为转录因子,能够调节Tri101发挥作用。[结论]分离鉴定出一株能够抑制禾谷镰刀菌生长的菌株,并鉴定为解淀粉芽孢杆菌。确定了上清液产抑菌物质最佳发酵条件,并初步确定抑菌物质可能为脂肽类物质,该菌株上清液能够抑制禾谷镰刀菌产DON相关基因表达。
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