丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)感染引起的一种重大传染性疾病，呈全球性流行，导致严重的发病率和致死率。鉴于现有的标准治疗方案(聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)与利巴韦林（RBV）联合治疗）的总体疗效有限，并且尚无针对丙型肝炎的预防疫苗，因此研发新型的抗HCV药物迫在眉睫。近年来，随着直接作用于病毒蛋白的抗病毒药物(direct-acting antiviral agents，DAAs)逐渐在临床上的应用，为治愈丙型肝炎带来了希望，但是DAAs长期使用易诱发产生病毒耐药。为克服这一问题，科学家们将研发重点转向联合用药，和开发以宿主细胞蛋白为靶点的抗病毒药物。我们研究团队实验研究发现化合物IMB-DM122是一个以宿主细胞蛋白为靶点的新型的抗HCV候选化合物，毒性低。其抗HCV的作用是通过作用于HSC70 mRNA的3UTR反应元件降低其稳定性，下调胞内HSC70蛋白的表达，从而减少病毒包装至病毒颗粒内HSC70蛋白水平，降低子代病毒的感染力，最终起到抗HCV复制的作用。但IMB-DM122作用效果和作用特点仍有待深入分析，这也是本论文的研究内容。　　本论文第一部分优化了蛋白免疫印迹(Western Blot，WB)半定量分析方法，在此基础上，论文第二部分进一步探讨了IMB-DM122抗HCV的药效学作用及其优点。　　本论文首先提取了HCV感染的Huh7.5细胞内总蛋白，经定量后，以HCV编码的核心蛋白(Core)为目的蛋白，以管家基因编码的蛋白Tubulin或Gapdh为内参对照，分析蛋白上样量、抗体浓度及孵育时间、发光液浓度等可变因素对WB半定量分析结果的影响。结果显示，WB半定量结果中目的蛋白相对强度与蛋白总上样量之间只在一定上样量范围内有线性关系，超出线性范围会导致相对蛋白强度变化幅度减少，甚至无变化;上样体积、内参的选择不影响实验结果;在条带质量较好的前提下，一抗浓度及其孵育时间和发光液浓度也不改变实验结果;但是半定量有一定的缺陷，实验结果存在一定的误差，应在15％以内。因此，影响WB半定量结果的主要因素仍为目的蛋白的上样量;在能获得条带质量较好的前提下，改变上样体积和抗体孵育时间、适当稀释抗体和发光液浓度有利于实验进展而不影响实验结果。　　在分析了WB半定量结果影响因素之后，本论文进一步探讨了IMB-DM122在细胞培养内抗HCV作用效果及其特点。结果显示，IMB-DM122不仅在急性感染的细胞培养内具有抗HCV活性，在长期感染的Huh7.5细胞培养内也具有抗HCV活性，且存在一定的剂量依赖性以及时效性;随后，通过联合给药的实验探究发现，IMB-DM122联合IFN或VX-950能增强抗HCV的活性，相比于单独给药组，联合给药处理的细胞，具有更为显著的抗HCV的效果。紧接着，本论文分析了IMB-DM122对耐药HCV的抗病毒活性。通过阳性药物Simepervir和Sofosbuvir处理HCV感染的Huh7.5细胞，使其产生耐药，获得耐药病毒株，分析IMB-DM122对耐药株的抗病毒活性。结果显示，IMB-DM122对耐药病毒株也显示了同样的抗病毒活性。最后，本论文探究了IMB-DM122对其作用靶点家族的特异性。实验结果显示，IMB-DM122的抗HCV作用主要是通过降低HSC70这一特异性靶点发挥作用的，而对HSP70家族中的其它成员HSP70、GRP75和GRP78作用不明显，对其它热休克蛋白如HSP90、HSP60的作用也不明显，说明IMB-DM122的作用靶点具有特异性。　　本论文结论及其意义:IMB-DM122不仅在急性感染的细胞培养内具有抗HCV活性，在长期感染的Huh7.5细胞培养内也同样具有抗HCV的活性，并可与IFN或VX-950联合用药以增强抗HCV的活性，对DAAs耐药病毒株也显示了同样的抗病毒活性，其抗病毒作用具有靶点特异性，对其它热休克家族成员的抑制作用不明显。论文结果为寻找宿主细胞内的抗病毒靶点提供了科学依据，也为发现新的抗病毒药物提供了重要模式。