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猪乙型脑炎又称之为日本乙型脑炎(Japanese encephalitis),是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种人畜共患急性传染病。JEV感染主要引发猪繁殖障碍疾病,接种猪乙型脑炎病毒灭活疫苗能有效预防和控制该病。本研究从疑似猪乙型脑炎的临床病料中分离到1株JEV病毒,对其进行了生物学鉴定和适应性培养研究,并使用所培养的细胞适应株作为免疫原成功制备了JEV的兔源高免血清。取流产胎儿脑组织经处理后接种BHK21细胞,每日观察细胞病变,连续观察5天,然后连续盲传。JEV分离株盲传至第6代开始产生细胞病变,接种细胞36h观察到轻微的细胞病变,48h时,细胞病变达80%。针对JEV的E基因设计特异性引物,对盲传后的病毒液进行JEV的检测。结果表明使用所建立的JEV RT-PCR检测方法对产生细胞病变的分离株进行检测扩增出特异性条带,由此表明使用BHK21细胞成功分离到一株JEV病毒,将其命名为JEV-SC株。将检测为阳性的JEV继续传代使其适应BHK21细胞,待出现细胞病变后通过蚀斑实验对所分离的病毒进行纯化。对纯化后的病毒以及不同代次的JEV分离毒株进行TCID5o的测定,分析不同代次毒株在BHK-21细胞上的适应性。并将其接种VERO细胞,比较JEV分离株在不同细胞上的增值特性。然后使用在BHK21上稳定传代的JEV分离株作为抗原,免疫家兔,制备兔源高免血清。使用蚀斑实验对JEV-SC株进行纯化并连续传代,连续传代至10代后可以观察到稳定的细胞病变,测得JEV-SC株的TCID50为107·21/ml。将JEV-SC株分别接种Vero细胞和BHK-21细胞,结果显示Vero细胞接种JEV-SC株后12h-48h出现细胞病变,随着时间的延长细胞病变数量逐渐增加,接种84h后病变细胞达到90%。BHK21细胞接种后24h可以观察到细胞病变,病变特征与VERO细胞类似,接种细胞后约60h病变细胞达到90%。以上结果表明JEV-SC株在BHK21细胞上病变较VERO细胞明显,更适于该病毒的培养。将JEV-SC株接种BHK21细胞后不同时间收集培养上清测定上清中病毒含量,结果显示病毒滴度在8h-40h期间呈上升趋势,在40h-64h期间趋于稳定且在56h左右达到最大值,64h以后病毒滴度开始下降。使用适应性培养的JEV-SC株作为免疫原免疫家兔后成功获得了JEV兔源高免血清,琼脂糖扩散实验证实所制备的高免血清效价为1：32。