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目的:通过中药角药对人胃癌SGC7901肿瘤细胞介导的缺氧诱导因子HIF-1α通路下游的uPA、uPAR基因的表达的影响,探讨中药角药对人胃癌SGC7901肿瘤细胞侵袭与迁移的影响。
方法:大鼠饲养:选取50只雌雄各半的健康清洁级SD大鼠,采通过EXCEL随机数字生成法将50只SD大鼠随机分成5组并逐个编号,在实验中心适应性喂养1周,控制大鼠体重(200±20g)。中药角药含药血清制备:制备中药角药煎剂,并调整其浓度为每1ml药液中含有中药生药0.11g,设置为中药高、中、低剂量组(8.000g/kg/d、剂量组4.000g/kg/d、低剂量组2.000g/kg/d),阳性对照组采取(氟尿嘧啶,0.025g/kg/d)腹腔注射,阴性对照组采取(生理盐水,10g/kg/d)灌胃,每次2ml。标准化每天定时用药1次,常规饲养,连续给药1周,末次给药2h后,按照外科无菌操作原则,采取腹主动脉采血后提取各组含药血清。体外细胞培养:常规培养、传代、冻存、复苏,并通过镜下观察和细胞计数明确细胞生长情况;对数生长期时含药血清干预培养,进行下一步实验。划痕实验检验中药角药在体外对SGC7901细胞迁移能力的情况;transwell实验检测肿瘤细胞侵袭能力;Western-blot实验检测各组细胞HIF-1α/uPA/uPAR蛋白表达。RT-PCR技术检测各组细胞HIF-1α、uPA、uPARmRNA的表达情况,从而探讨中药角药抗肿瘤作用机制。
结果:体外缺氧条件下:1.中药角药可抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭及转移作用。2.中药角药可抑制人胃癌SGC7901肿瘤细胞缺氧微环境中HIF-1α/uPA、uPAR蛋白和mRNA的表达。3.中药角药抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭及转移具有浓度依赖性,随着浓度增高,其抑制作用越强。
结论:中药角药可能是通过作用于肿瘤缺氧微环境中HIF-1α/uPA、uPAR缺氧信号通路发挥抗肿瘤作用。
方法:大鼠饲养:选取50只雌雄各半的健康清洁级SD大鼠,采通过EXCEL随机数字生成法将50只SD大鼠随机分成5组并逐个编号,在实验中心适应性喂养1周,控制大鼠体重(200±20g)。中药角药含药血清制备:制备中药角药煎剂,并调整其浓度为每1ml药液中含有中药生药0.11g,设置为中药高、中、低剂量组(8.000g/kg/d、剂量组4.000g/kg/d、低剂量组2.000g/kg/d),阳性对照组采取(氟尿嘧啶,0.025g/kg/d)腹腔注射,阴性对照组采取(生理盐水,10g/kg/d)灌胃,每次2ml。标准化每天定时用药1次,常规饲养,连续给药1周,末次给药2h后,按照外科无菌操作原则,采取腹主动脉采血后提取各组含药血清。体外细胞培养:常规培养、传代、冻存、复苏,并通过镜下观察和细胞计数明确细胞生长情况;对数生长期时含药血清干预培养,进行下一步实验。划痕实验检验中药角药在体外对SGC7901细胞迁移能力的情况;transwell实验检测肿瘤细胞侵袭能力;Western-blot实验检测各组细胞HIF-1α/uPA/uPAR蛋白表达。RT-PCR技术检测各组细胞HIF-1α、uPA、uPARmRNA的表达情况,从而探讨中药角药抗肿瘤作用机制。
结果:体外缺氧条件下:1.中药角药可抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭及转移作用。2.中药角药可抑制人胃癌SGC7901肿瘤细胞缺氧微环境中HIF-1α/uPA、uPAR蛋白和mRNA的表达。3.中药角药抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭及转移具有浓度依赖性,随着浓度增高,其抑制作用越强。
结论:中药角药可能是通过作用于肿瘤缺氧微环境中HIF-1α/uPA、uPAR缺氧信号通路发挥抗肿瘤作用。