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目的:研究中医滋阴疏肝经典方剂一贯煎对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的大鼠肝癌模型干预情况及其对肝组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨中医药干预肝癌的防治方法。
方法:SPF级雄性SD大鼠40只,适应性喂养1周后进入实验,若大鼠状况良好则选入后续实验。将实验大鼠随机分配为四个组:空白组、模型组、一贯煎低剂量组及一贯煎高剂量组,每组各分配10只。模型组与中药组每组进行腹腔内注射DEN,50mg/kg,2次/周,至16周结束。自建立模型开始时,空白组及模型组以10ml/kg计算予以无菌蒸馏水灌胃,每天一次;一贯煎高剂量组用2mg/ml中药溶液,根据体重按10ml/kg予以灌胃,每天一次,至16周结束;一贯煎低剂量组以1mg/ml中药溶液,根据体重按10ml/kg予以灌胃,每天一次,至16周结束。于16周灌胃后24小时后处死大鼠,处死前分别观察记录大鼠的一般状况,处死后进行心脏采血,检测ALT、AST、GGT、ALP、TBIL各项肝功能指标水平;完整取出肝脏组织,肝脏标本进行苏木精-伊红染色(HE染色),观察肝脏病理改变;免疫组化法检测肝脏组织内VEGF的表达情况。
结果:1.一贯煎可改善DEN造模肝癌大鼠的一般情况,模型组一般状态明显差于给药组,模型组死亡率较其他三组高;给药组中一贯煎高剂量组的一般状态较好,一贯煎低剂量组则差于一贯煎高剂量组大鼠表现,且死亡率较高剂量组高。2.一贯煎对DEN诱导的肝癌大鼠肝功能具有明显的改善作用:与空白组比较,模型组大鼠的ALT、AST、GGT、ALP、TBIL均升高明显,肝功能显著下降;与模型组相比,一贯煎高、低剂量组的ALT、AST、GGT、ALP、TBIL均明显降低,肝功能有所改善,其中一贯煎高剂量组较一贯煎低剂量组效果更佳(p<0.05)。3.一贯煎可干预肝癌大鼠肝脏病理形态:一贯煎高剂量组较其他组对于改善DEN造模的肝癌大鼠病理形态疗效更加显著,可显著减轻肝脏炎症反应,减少肝脏结节发生,减轻肝脏损伤。HE染色可见一贯煎可有效降低肝实质细胞坏死,纤维化改变,减少肝细胞异型增生及核分裂相,显著减少炎性细胞浸润。4.免疫组化法检测VEGF表达水平结果表明,模型组表达水平显著高于其余三组(p<0.05);一贯煎高剂量组VEGF表达水平较一贯煎低剂量组明显减少(p<0.05)。
结论:1.一贯煎可明显改善DEN诱发肝癌模型大鼠的肝功能,具有保肝作用;2.一贯煎对肝癌大鼠病理组织形态有一定的影响,增生细胞异型性显著变小,核分裂象减少,并且炎症情况较模型组显著减轻,高剂量组效果更佳;3.一贯煎可延缓大鼠肝癌模型的进展,其机制可能与降低其肝组织中的VEGF表达水平有关。
方法:SPF级雄性SD大鼠40只,适应性喂养1周后进入实验,若大鼠状况良好则选入后续实验。将实验大鼠随机分配为四个组:空白组、模型组、一贯煎低剂量组及一贯煎高剂量组,每组各分配10只。模型组与中药组每组进行腹腔内注射DEN,50mg/kg,2次/周,至16周结束。自建立模型开始时,空白组及模型组以10ml/kg计算予以无菌蒸馏水灌胃,每天一次;一贯煎高剂量组用2mg/ml中药溶液,根据体重按10ml/kg予以灌胃,每天一次,至16周结束;一贯煎低剂量组以1mg/ml中药溶液,根据体重按10ml/kg予以灌胃,每天一次,至16周结束。于16周灌胃后24小时后处死大鼠,处死前分别观察记录大鼠的一般状况,处死后进行心脏采血,检测ALT、AST、GGT、ALP、TBIL各项肝功能指标水平;完整取出肝脏组织,肝脏标本进行苏木精-伊红染色(HE染色),观察肝脏病理改变;免疫组化法检测肝脏组织内VEGF的表达情况。
结果:1.一贯煎可改善DEN造模肝癌大鼠的一般情况,模型组一般状态明显差于给药组,模型组死亡率较其他三组高;给药组中一贯煎高剂量组的一般状态较好,一贯煎低剂量组则差于一贯煎高剂量组大鼠表现,且死亡率较高剂量组高。2.一贯煎对DEN诱导的肝癌大鼠肝功能具有明显的改善作用:与空白组比较,模型组大鼠的ALT、AST、GGT、ALP、TBIL均升高明显,肝功能显著下降;与模型组相比,一贯煎高、低剂量组的ALT、AST、GGT、ALP、TBIL均明显降低,肝功能有所改善,其中一贯煎高剂量组较一贯煎低剂量组效果更佳(p<0.05)。3.一贯煎可干预肝癌大鼠肝脏病理形态:一贯煎高剂量组较其他组对于改善DEN造模的肝癌大鼠病理形态疗效更加显著,可显著减轻肝脏炎症反应,减少肝脏结节发生,减轻肝脏损伤。HE染色可见一贯煎可有效降低肝实质细胞坏死,纤维化改变,减少肝细胞异型增生及核分裂相,显著减少炎性细胞浸润。4.免疫组化法检测VEGF表达水平结果表明,模型组表达水平显著高于其余三组(p<0.05);一贯煎高剂量组VEGF表达水平较一贯煎低剂量组明显减少(p<0.05)。
结论:1.一贯煎可明显改善DEN诱发肝癌模型大鼠的肝功能,具有保肝作用;2.一贯煎对肝癌大鼠病理组织形态有一定的影响,增生细胞异型性显著变小,核分裂象减少,并且炎症情况较模型组显著减轻,高剂量组效果更佳;3.一贯煎可延缓大鼠肝癌模型的进展,其机制可能与降低其肝组织中的VEGF表达水平有关。