狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的急性致死性脑炎,一旦出现临床症状,死亡率几乎能达到100%。狂犬病作为目前世界流行广泛的人兽共患病,虽然人们已认识到了它的危害,但每年仍然导致超过55,000人死亡。目前,控制狂犬病以注射疫苗为主。因此,为了研发更高效的疫苗,充分认识狂犬病病毒各基因对机体的作用有着重大意义。血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)作为外周循环和中枢神经系统(central nerves system,CNS)之间的有机屏障,起着维持脑内环境稳定和避免有害物质进入中枢神经系统的作用。通常,血脑屏障由紧密连接蛋白(tight junction protein)将血管上皮细胞连接在一起形成致密的屏障结构。但微生物的产物能造成血脑屏障的破坏,从而导致血脑屏障通透性升高。所以在临床上,血脑屏障一方面能保证中枢神经系统不受外周有害物质的侵袭,另一方面它也阻碍了治疗性物质进入中枢神经系统,加大了治疗神经性疾病的难度,而对于狂犬病病毒,尚无关于每个结构基因对血脑屏障影响的研究。在本研究中,我们将狂犬病病毒强毒株GD-SH-01株、弱毒株HEP-Flury、以及HEP-Flury五个结构基因被GD-SH-01替换的重组毒株r HEP-SH-N、rHEP-SH-P、rHEP-SH-M、rHEP-SH-G和r HEP-SH-L感染小鼠,我们发现,在感染后第9天,两株亲本毒株和重组毒株rHEP-SH-N、rHEP-SH-M、rHEP-SH-G和rHEP-SH-L的小鼠血脑屏障通透性都有不同程度的增强并且发病,只有rHEP-SH-P感染的小鼠血脑屏障通透性几乎不变,并且小鼠几乎不发病。为探究其原因,我们先检测了感染亲本毒株和rHEP-SH-P的小鼠的紧密连接蛋白的表达水平,发现rHEP-SH-P感染小鼠的紧密连接蛋白表达水平比亲本株感染的小鼠都要高。接着,通过qRT-PCR检测了rHEP-SH-P、HEP-Flury和GD-SH-01三株病毒P基因和N基因的表达水平,我们发现rHEP-SH-P的P基因表达受到抑制,导致N基因的表达也受到抑制,说明其复制能力不如亲本毒株。而通过检测体内的病毒载量,我们发现r HEP-SH-P的病毒载量显著高于亲本毒株,以及通过免疫组化(IHC)发现rHEP-SH-P感染的小鼠脑中T细胞浸润量要低于亲本株,这说明由于rHEP-SH-P的感染能维持血脑屏障的完整,从而外周淋巴细胞无法进入中枢神经系统及时清除病毒,导致病毒含量高。最后,我们检测了感染三株病毒后,小鼠脑中的炎症炎症因子表达量,我们发现rHEP-SH-P诱导的炎症反应不如亲本毒株GD-SH-01。综上所述,GD-SH-01的P基因的表达在HEP-Flury的基因骨架上受到抑制,从而病毒复制水平降低,导致致病性降低以及诱导炎症反应的能力降低,因此维持BBB的完整性,说明病毒的复制能力是诱导炎症反应的关键因素。