研究背景:急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)是威胁人类生命健康的常见血液系统恶性疾病。其治疗花费大,周期长,给患者及家庭造成巨大负担。尽管有新药不断涌现,化疗方案和治疗方法不断完善,目前除了急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)外,AML的长期预后仍未得到明显改善。临床治疗过程中多数AML患者易出现耐药、复发,对化疗药物失去敏感性,甚至出现原发性耐药,这是导致AML远期疗效不佳的重要原因之一。因此,深入研究AML的耐药机制,寻找新的肿瘤治疗靶点,破解AML耐药难题已成为当前的研究热点。不断有证据显示肿瘤细胞与肿瘤微环境之间的相互作用,是包括AML在内的肿瘤细胞发生耐药的重要机制之一。骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstromal/stemcells,BMMSCs)是AML骨髓微环境中的重要细胞成分,其在保护AML细胞免受化疗药物诱导的凋亡中起到重要的作用,但是目前其保护机制尚未完全阐明。研究发现,在实体肿瘤中,BMMSCs能够被肿瘤细胞及其分泌的细胞因子趋化至实体肿瘤微环境中,在肿瘤细胞的“教育”下,与肿瘤细胞“共进化”,转变成为肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associatedfibroblasts,CAFs),参与肿瘤的发生、耐药、侵袭转移、免疫逃逸以及调控肿瘤炎症微环境变化等。成纤维细胞活化蛋白α(fibroblastactivationproteinalpha,FAPα)被认为是CAFs的一个重要的功能分子标记。研究显示,FAPα在CAFs介导的肿瘤的耐药、发生发展以及免疫逃逸中起到重要的作用,且FAPα的表达水平与肿瘤的不良预后有关,因此FAPα成为肿瘤治疗的新靶点。既然BMMSCs能够被趋化至实体肿瘤微环境中,活化成为CAFs,参与CAFs的形成。那么,在血液系统恶性肿瘤微环境中,BMMSCs是否一样能够被活化成为CAFs?FAPα在介导BMMSCs促进AML抗化疗药物诱导的凋亡中起到了什么种作用,其机制是什么?FAPα能否成为破解AML耐药的新靶点?基于上述研究背景及目前存在的问题,我们开展了本项目相关研究。目的:探讨AML患者BMMSCs的FAPα的表达水平及临床意义,比较AML患者及健康对照组BMMSCs之间FAPα表达的差异。以及FAPα在介导BMMSCs保护AML抗Ara-C诱导的凋亡中的作用及可能的机制。研究方法:通过分离纯化获得初治AML患者以及健康对照者的BMMNCs,通过体外传代培养获得BMMSCs,并通过流式细胞术鉴定BMMSCs表面分子标记;采取流式细胞术、RT-qPCR及免疫荧光技术检测FAPα在BMMSCs中的表达水平。通过免疫组织化学染色检测骨髓活检组织FAPα的表达水平,随后分析AML患者骨髓活检组织FAPα表达水平与临床指标以及生存时间的相关性。最后通过小干扰(smallinterfering,si)RNA敲低BMMSCs的FAPα后,采取流式细胞术的方法检测阿糖胞苷(Ara-C)诱导的Kasumi-1细胞凋亡比例的变化,并通过WesternBlot探讨其潜在的机制。结果:1、培养获得的BMMSCs粘附在培养瓶上,具有粘塑性,呈成纤维细胞样形态。流式细胞术检测传代至第二代的BMMSCs分子标记,显示CD14、CD34和CD45呈低表达,CD90和CD105呈高表达。2、初治AML患者和健康对照组BMMSCs的FAPα表达水平分别为:流式结果:(70.92±4.38%vs36.74±10.37%;P=0.0072),RT-qPCR结果:(24.75±2.75vs.9.77±1.94;P=0.0001)。3、观察到在骨髓基质中呈棕黄色区域即为FAPα的阳性表达;AML骨髓活检组织FAPα的OD/area值明显高于健康对照组(11.88±4.55vs.5.16±3.67;P=0.0001;n=15)。FAPα的OD/area值与流式细胞术检测到的骨髓中原始幼稚细胞比例呈正相关(r=0.878;P