60Co-γ射线辐射酸柚花粉对马家柚育性及品质影响的研究

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马家柚(Citrus maxima(L.)Osbeck cv.Majiayou)为广丰区选育出的特色品种,其果实体积大,果肉粉红,多汁爽口,且糖含量较低,深受消费者喜爱。但是普通马家柚种子较多,单果种子数120-200粒左右,这严重影响了它的商品性和市场竞争力。本研究用60Co-γ射线辐照酸柚花粉,之后对马家柚进行授粉,成功获得了无核马家柚。本研究首先通过不同剂量60Co-γ射线辐照酸柚花粉,并从果实品质和发育生理学上对得到的无核马家柚进行综合评价,期望获得适合生产推广的60Co-γ射线辐照剂量,生产出无核且品质较好的马家柚果品。然后分别从细胞学和分子水平上探索其诱导马家柚无核的机理。为果实无核机理研究及无核柚生产提供技术依据。研究结果如下:(1)随着辐射剂量的增加,果实的座果率在不同发育期都在不断地降低。果实成熟时,对照的座果率与100 Gy无显著差异,但显著高于600 Gy和1000 Gy,同时600Gy和1000 Gy显著高于1400 Gy。在果实的整个发育过程中,各辐射处理的果实横径、纵径都略低于对照,1400 Gy的果实横径、纵径最小,显著低于对照,但100 Gy、600 Gy和1000 Gy与对照并没有显著差异。对各处理的成熟果实的种子观察发现,对照果实的种子大而饱满,100 Gy的种子出现部分退化,600 Gy、1000 Gy和1400 Gy处理的果实的完全无籽,只有干瘪的小种子,而且随着辐射剂量的增加,种子的总数也在逐渐的减少。(2)对各处理进行果实品质分析,结果表明,与正常果实相比辐射量较大时(1400Gy)时,果实变小、出现畸形并且果皮厚度增大。而较低时(100 Gy),饱满种子数量依然较多。剂量600-1000 Gy除果实大小和重量略有下降外(单果重下降约100 g),其他品质未出现明显的下降。(3)授粉后的前2周,幼果中内源激素含量迅速增加,其中对照中生长促进类激素显著高于辐射处理。生理落果期,辐射处理种子中都显著低于对照,但相反,辐射处理果肉中生长促进类激素极显著高于对照,并且辐射处理果皮中IAA含量也显著高于对照。在果实膨大期,对照和辐射的果皮和果肉中(IAA+GA3+ZR)/ABA的比值都处于较高的水平,这是辐射处理种子败育后果实仍能正常膨大的原因。(4)随着辐射剂量的增加,花粉的萌发率和花粉管的伸长长度在逐渐的降低。但对照与100 Gy、600 Gy、1000 Gy之间花粉萌发率和花粉管的伸长长度没有显著差异,只有1400 Gy萌发率和花粉管的伸长长度显著低于对照和100 Gy。辐射处理过的花粉在柱头上仍然可以萌发,且柱头、花柱和子房并不会阻止花粉管伸长,花粉管可以伸长到胚珠中;授粉5 d后,对子房进行横切,观察到对照有大量花粉管伸入到子房,而1000 Gy伸长到子房中的花粉管数量明显减少。随着花粉辐射剂量的增加,花粉染色体的荧光强度在不断地降低,与对照相比,600 Gy、1000 Gy、1400 Gy出现了显著降低。表明花粉经过辐射之后,可能染色体受损,DNA双螺旋结构遭到破坏。(5)制作石蜡切片观察了胚胎的发育过程,结果显示:授粉后1周时,极核完成受精,胚乳立即开始分裂,产生游离核,并不断增殖;授粉后4周时,对照游离核已充满了整个胚囊,而1000 Gy的胚乳出现了部分退化;授粉后7周时,对照胚囊中胚乳出现了细胞化,而1000 Gy胚囊发育缓慢或停止发育,胚囊中游离核胚乳退化,甚至有胚囊中空的现象发生;授粉后10周时,对照胚囊中胚发育至子叶胚,而1000Gy胚囊中没有观察到胚的发育,胚乳已完全退化,胚囊萎缩,呈狭长中空状。(6)从马家柚中克隆出两个胚胎发育相关基因,分别命名为CmWOX2和CmFIE。对2个基因进行生物信息学分析,结果表明CmWOX2基因c DNA序列全长1177 bp,含有750 bp的开放阅读框,编码249个氨基酸。CmFIE基因c DNA序列全长1235 bp,含有1110 bp的开放阅读框,编码369个氨基酸。对CmWOX2和CmFIE基因在马家柚中的时空表达分析可知:CmWOX2基因在马家柚的种子和幼苗根、茎、叶中均有表达,在种子中的表达量最高,其次为根和茎,在叶中表达量最低。在种子中的发育过程中,CK中CmWOX2基因的表达量始终要高于1000 Gy;CmFIE基因在马家柚种子和幼苗根、茎、叶中均有表达,在种子中的表达量最高,茎和叶中的表达量次之,表达量最低是在根中。在种子中的发育过程中,CK中CmFIE基因的表达量始终要低于1000 Gy。
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