【摘 要】
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目的:真核细胞基因组DNA 包含于染色质中,DNA 围绕组蛋白八聚体形成的核小体是染色质的基本构成单位。所形成的染色质除了包装DNA 外,还可通过其结构的调整,即组蛋白共价修饰
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目的:真核细胞基因组DNA 包含于染色质中,DNA 围绕组蛋白八聚体形成的核小体是染色质的基本构成单位。所形成的染色质除了包装DNA 外,还可通过其结构的调整,即组蛋白共价修饰和ATP 依赖的染色质重塑复合物,有效地“开/关”DNA,诱导或阻遏转录激活子与DNA 的结合,从而促进或抑制基因的表达。核心组蛋白尾部发生的多种共价修饰包括乙酰化、磷酸化、甲基化、泛素化、SUMO 化等,参与基因的激活与抑制调控过程,形成组蛋白密码,成为一种重要的表观遗传标志。我们通过建立一种染色质体外组装体系,为更好的研究组蛋白修饰及各种修饰之间的相互作用对基因转录调控的作用奠定了基础。在染色质组装过程中(H3/H4)2 四聚体首先与DNA 结合,随后H2A/H2B 两个异源二聚体再结合到(H3/H4)2结合处的5’和3’DNA 上形成核小体。研究表明许多分子伴侣参与核小体形成,大多是核心组蛋白的结合蛋白,如核小体组装蛋白-1(nucleosome assembly protein-1, NAP-1)可以优先与组蛋白H2A 和H2B 结合,协助组蛋白与DNA 的结合。据此,我们从HeLa 细胞中提取纯化核心组蛋白,并应用昆虫表达体系表达、提取染色质组装相关因子NAP-1,从而为进一步在染色质模板上研究基因表达调控机制提供有效的方法。
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