彗星试验——一种DNA损伤水平与修复能力的测定方法

来源 :第五次全国中青年检验医学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kingper
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在细胞和生物组织中,由于自由基(Free Radical,FR)随龄累积,基因损伤水平升高.除此以外,某些物理、化学因素亦可致基因损伤,从而诱导细胞周期停滞、细胞转化、端区缩短速度加快,并引起基因表达变化.组织细胞中由DNA聚合酶、DNA连接酶等组成的损伤修复系统可修复上述因素诱导的基因损伤,其修复能力随龄下降.如何定性/定量检测基因损伤水平与修复能力在临床及生命科学基础研究中凸显重要,彗星试验(Comet Assay)又称单细胞凝胶电泳(Single Cell Gel Electrophoresis,SCGE)试验,其可定性或定量测定DNA单链断裂水平,准确反映DNA损伤水平与修复的能力,该方法目前在国际上较为流行,本文意在介绍彗星试验方法,并简述其初步应用结果。
其他文献
本文为了对肝豆状核变性基因第8外显子突变热点区进行快速筛查和便于临床基因诊断的需要,利用DHPLC技术对Wilsons病基因第8外显子突变热点区进行了突变检测,通过测序证实,DHPLC技术的阳性检出率为100﹪,此技术具有快速、敏感、准确且经济的特点,可用于临床肝豆状核变性的基因诊断。
本文为建立金属β内酰胺酶基因(blaIMP)简并引物聚合酶链反应方法,从美国国立生物信息中心(NCBI)[www.ncbi.nlm.nih.gov]检索已登录的blaIMP基因,自行设计简并引物和PCR反应体系。研究结论:简并引物PCR法检测blaIMP基因的建立将有利于产金属β内酰胺酶菌筛查和监测。
本文用大肠杆菌表达系统分别表达了SARS-CoV的结构蛋白S、N、M、E和非结构蛋白3CL,并用SARS恢复期患者血清对重组病毒蛋白的抗原性的进行了Western-blot分析;再根据表达载体的多克隆位点和阅读框架的要求,分别合成各抗原基因引物,以合成的基因为模板,扩增相应的抗原基因。研究结果表明,N抗原和S抗原可作为SARSCoV感染的重要检测抗原.
本文将汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G1基因与Ras基因连接,构建嵌合基因Ras-G1及Ras-G1(G1无前导肽序列);将两个嵌合基因克隆入酵母表达载体pMet25,并染至酵母温度敏感株cdc25-2,并检测其对RRS系统的激活作用。研究结论:Met-G1和Met-G1载体可用于从cDNA文库中筛选汉滩病毒受体。
本文根据毕赤酵母密码子偏性合成了人IFN-β1a基因,克隆至分泌型酵母表达载体pMEX9K,将重组载体pMEXbeta线性化后,电转化毕赤酵母GS115,用甲醇诱导转化子,细胞病变抑制法测定诱导上清的抗病毒活性筛选高表达克隆,WesternBlot检测人IFN-β的表达。研究结论:具有抗病毒活性的人IFN-β在毕赤酵母中获得表达。
本文将上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞,对培养液负染色标本和Vero细胞超薄切片标本进行TEM观察。研究结论:本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARS冠状病毒(SARS-CoV)相符。
急性早幼粒细胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)是M3型急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML),占全部AML的10%-15%.在大多数的APL患者中可检测到t(15;17)(q22;q21)染色体易位所致的PML-RAR?融合基因,其产物PML-RAR?融合蛋白干扰了维甲酸信号传导通路,使细胞分化停滞在早幼粒细胞阶段.全反式
目前基因芯片技术广泛应用于临床仍存在着一些困难,其中一个共性的问题就是样品制备方面的不足:即通常为提高检测灵敏度和特异性,需针对各检测对象分别设计引物,甚至建立不同的扩增体系、扩增方法和扩增条件,来进行多重的PCR扩增.这显然大大增加了工作量和工作难度,从而在一定的程度上限制了芯片技术的高通量、高速度的发挥,严重制约了病原微生物的芯片检测在临床及其他环境的广泛应用.本研究针对多重PCR法芯片检测样
α-珠蛋白生成障碍性贫血(Thalassemia,简称地贫、Thal)是我国长江以南发病率最高、影响最大的常染色体隐性遗传病.根据所减少的珠蛋白类型,可分为α-、β-、δ-、δβ-、γδβ地中海贫血等.α-地贫(α-Thal)是最要的地贫类型之一.也是全世界热带地区及亚热带地区最常见的遗传病之一.α-Thal是具有高度异质性的单基因遗传病.α-Thal主要是由于α-珠蛋白基因合成的减少或缺失所致.
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种重要的条件致病菌,可引起多种感染性疾病.2002年全国细菌耐药性监测网调查显示:PA的分离率为10.3%,仅次于大肠埃希菌而居第二位.近年来,铜绿假单胞菌对3、4代头孢和亚胺培南在内的多种β-内酰胺类抗生素及氨基糖苷类抗生素耐药率一直处于一个比较高的水平,并且呈现逐年上升的趋势.整合子是一个新的耐药基因传播元件,由5保守区、3