【摘 要】
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目的：通过动物活体研究揭示p120-catenin表达对ALF内皮损伤和炎性激活的影响,进一步分析p120cnt的抗炎效应是否可以通过对Epac1信号通路的调控来发挥作用.方法：查询GenBank中大鼠p120cnt cDNA文库,设计引物,PCR扩增目的基因,琼脂糖电泳鉴定结果.经酶切、连接克隆至带绿色荧光蛋白(6FP)的表达载体,转化E.Coli JM109并筛选阳性菌落,提取重组质粒后酶切,
【机 构】
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江西省人民医院消化内科,南昌330006
【出 处】
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2017中国医师协会消化医师分会年会
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目的：通过动物活体研究揭示p120-catenin表达对ALF内皮损伤和炎性激活的影响,进一步分析p120cnt的抗炎效应是否可以通过对Epac1信号通路的调控来发挥作用.
方法：查询GenBank中大鼠p120cnt cDNA文库,设计引物,PCR扩增目的基因,琼脂糖电泳鉴定结果.经酶切、连接克隆至带绿色荧光蛋白(6FP)的表达载体,转化E.Coli JM109并筛选阳性菌落,提取重组质粒后酶切,测序验证确保表达框无误.健康雄性Wistar大鼠36只,体重(220±10)g,随机平均分为正常对照组、ALF模型组、质粒转染+ALF建模组三组.LPS联合D-Ga1N法构建ALF动物模型,裸质粒流体力学基因转染法转染大鼠,肝组织切片荧光显微镜观察转染是否成功.以上处理12小时后处死大鼠取肝组织切片进行HE染色及TUNEL分析,评估各组肝细胞坏死程度;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)评估各组肝组织p120cnt mRNA及Epac1mRNA表达水平.
结果：PCR扩增目的基因,1.2％琼脂糖电泳显示目的基因约2800bp.真核表达重组体pCMV/p120ctn提取质粒后酶切,酶切产物基因测序显示质粒构建正确.基因转染后肝组织切片内可见大量GFP表达说明转染己成功.HE染色及TUNEL分析说明质粒转染+ALF建模组肝细胞坏死严重程度低于ALF模型组.半定量RT-PCR结果显示p120cnt mRNA在不同实验组中表达的相对灰度(p120cnt/GAPDH,以mean±SD表示)：正常对照组0.501±0.217;ALF模型组0.092±0.269;质粒转染+ALF建模组0.312±0.172;大鼠肝组织p120cnt mRNA表达在正常对照组中高于质粒转染+ALF建模组且都高于ALF模型组(均P＜0.01=;Epac1mRNA表达在不同实验组中表达的相对灰度(Epac1/GAPDH,以mean±SD表示)：正常对照组0.986±0.177;ALF模型组1.696±0.694;质粒转染+ALF建模组1.824±0.895;比较肝组织Epac1mRNA表达强弱顺序为质粒转染+ALF建模组高于ALF模型组(0.01＜P＜0.05=且都高于正常对照组(均P＜0.01=.
结论：p120cnt存在对ALF的抗炎作用和肝保护作用;p120cnt对肝组织急性炎症的抑制效应与上调Epac1基因表达有关.
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