【摘 要】
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本试验利用显微操作的方法分离斯氏艾美耳球虫和中型艾美耳球虫单个卵囊,利用阴离子去污剂SDS和蛋白酶K孵育,并结合液氮冻融的方法对卵囊进行裂解.继而利用引物延伸预扩增技术对裂解后获得的单卵囊基因组进行随机扩增.最后利用11个兔球虫种ITS-l基因的特异性引物对PEP产物进行巢式PCR鉴定.结果表明,结合PEP技术,成功建立了单卵囊PCR鉴定方法.该方法能够实现在单个卵囊基础上对具有种鉴定意义的靶基因
【机 构】
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中国农业大学动物医学院国家动物寄生原虫实验室,北京100193 Centers for Disea
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本试验利用显微操作的方法分离斯氏艾美耳球虫和中型艾美耳球虫单个卵囊,利用阴离子去污剂SDS和蛋白酶K孵育,并结合液氮冻融的方法对卵囊进行裂解.继而利用引物延伸预扩增技术对裂解后获得的单卵囊基因组进行随机扩增.最后利用11个兔球虫种ITS-l基因的特异性引物对PEP产物进行巢式PCR鉴定.结果表明,结合PEP技术,成功建立了单卵囊PCR鉴定方法.该方法能够实现在单个卵囊基础上对具有种鉴定意义的靶基因进行扩增分析,且具有较强的特异性和可重复性.利用单卵囊PCR技术,对20份卵囊含量较低的田间粪便样品进行了虫种检测,并成功确定了样品中所含兔球虫的种类.该技术的应用能够提高田间样品PCR检测的敏感性和准确度,为兔球虫感染情况的监测提供实践指导.随着兔球虫研究的不断深入,该技术有望在球虫遗传学、转基因球虫研究等领域提供相关研究基础.
其他文献
本实验克隆了KAP6.1启动子前482bp的序列并利用tfsearch在线软件进行调控原件分析预测，发现在延长区域有1个SRY顺势转录调控位点和C/EBPAP-1、CAP转录调节因子结合位点，还存在一个与上皮细胞分化相关转录因子skn-1的结合位点。接下来将利用延长后的1524bp启动子构建表达载体，并转染绵羊皮肤细胞进行检测，期望延长后的启动子能够提高转录效率。
本文介绍抗菌肽CAMA-syn能够在牛成纤维细胞BEF和鼠巨噬细胞RAW 264.7中表达，MSP启动子能够保证CAMA-syn的靶向性表达。哺乳动物细胞表达的抗菌肽CAMA-syn具有一定的抑菌生物活性，尤其是巨噬细胞特异性表达CAMA-syn能够抑制细菌的生长，这对于使用在淋巴系统中表达抗菌肽CAMA-syn的策略来制作转基因动物抵抗细菌感染性疾病具有重要意义。
不同物种间密码子偏爱性存在一定差异，将影响到外源基因在宿主中的表达效率，可通过密码子优化提高外源基因的表达水平。fat-1基因和牛肌肉蛋白相关基因的最优密码子使用大多不一致，fat-1基因简并密码子的第3个碱基倾向于使用A、T，而在牛肌肉中倾向于使用C、G。本研究替换了fat-1在牛肌肉中的限速密码子，并加上了Kozark保护序列，以期获得高效表达fat-1基因的转基因牛。本研究构建的表达载体含有
本文经过PCR、酶切和测序鉴定之后，确定4个干扰质粒和2个靶质粒都已经构建好。转染后，在显微镜下观察到转染干扰载体的细胞表达了绿色荧光蛋白，而转染2个靶载体的细胞也表达了红色荧光蛋白，证明质粒都构建成功。干扰效率有待于进一步的验证。
应用饱和蔗糖溶液漂浮法对河南、山东、东北等地的1052只绵羊球虫感染情况及种类进行了调查,结果表明球虫总感染率为94.8％,对968份阳性样本中的球虫卵囊进行形态学鉴定,共检出12种艾美耳球虫,分别为阿撒他艾美耳球虫、巴库艾美耳球虫、小型艾美耳球虫、贡氏艾美耳球虫、类绵羊艾美耳球虫、颗粒艾美耳球虫、苍白艾美耳球虫、马耳西卡艾美耳球虫、温布里吉艾美耳球虫、错乱艾美耳球虫、槌形艾美耳球虫和浮氏艾美耳球
采用饱和蔗糖溶液漂浮法对河南8个地区、重庆云阳和安徽合肥共1126份山羊粪便样品进行检查,发现1070份球虫阳性样品,总感染率为95.03％.对813份阳性样本中的球虫卵囊进行形态学鉴定,共发现12种艾美耳球虫,分别为阿普艾美耳球虫、阿氏艾美耳球虫、艾丽艾美耳球虫、斑点艾美耳球虫、苍白艾美耳球虫、家山羊艾美耳球虫、柯察艾美耳球虫、克氏艾美耳球虫、妮氏艾美耳球虫、山羊艾美耳球虫、羊艾美耳球虫和约奇艾
为构建在体外稳定表达EtMIC3及EtAMA1的重组沙门氏菌菌株,筛选免疫保护力强的候选重组减毒沙门氏菌活载体疫苗方法:从鸡球虫RNA中反转录获得cDNA,然后扩增得到EtMIC3和EtAMA1基因.将这两个基因克隆到沙门氏菌表达载体pYA3342,电转到减毒沙门氏菌表达菌株x4550.筛选能够在体外稳定表达EtMIC3和EtAMAl蛋白的重组菌株.减毒的鼠伤寒沙门氏菌具有在肠道黏膜上皮细胞中定居
本研究主要目的是研究柔嫩艾美尔球虫组织蛋白酶L的基因和蛋白结构,揭示其原核表达规律.选用未孢子化的柔嫩艾美尔球虫houghton株,通过与弓形虫的cathepsinL进行BLASTP找到其保守结构域,利用RT-PCR和RACE技术,分别获得其保守结构域和cDNA的5’和3’端序列,并将其重组于pET28-a(+),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)进行诱导表达.
本研究旨在调查奎屯地区奶牛养殖场奶牛球虫感染与流行情况,并根据调查结果进行驱虫方案的设计,为奶牛球虫病的防治提供理论依据.试验选取奎屯不同地区的5个规模化奶牛养殖场,直肠采集2:3月龄、6月龄、1-2岁、5-6岁四个年龄段奶牛的粪便,分别为:91份、95份、73份、31份,共290份；采用饱和蔗糖水漂浮法和离心沉淀法进行阳性样品的确定、卵囊的搜集；2.5％的重铬酸钾进行孢子化并置于室温下进行卵囊的
Toxoplasma gondii and Eimeria mitis are closely related apieomplexan parasites.The surface antigen 1 of T.Gondii (TgSAG 1) is a major immunodominant antigen and is considered to be a good candidate fo