目的:建立PCR方法鉴定黄艾美耳球虫;方法:单卵囊分离孢子化黄艾美耳球虫河北株并接种无球虫兔,后代卵囊再次接种无球虫进行增殖。CTAB法提取卵囊基因组DNA。在鸡柔嫩艾美耳球虫18S rR NA3’端和28S rRNA 5’端保守区设计艾美耳属通用引物,以黄艾美耳球虫河北株卵囊基因组DNA为模板扩增其完整ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列。在ITS1/2序列高变区设计种特异引物,以大型艾美耳球虫和肠艾美耳球虫卵囊基因组DNA验证引物的特异性。结果:单卵囊分离成功率50%,PCR扩增产物大小为1126bp,其中ITS1序列长330bp,5.8S rRNA序列长157bp,ITS2序列长522 bp,将黄艾美耳球虫河北株ITS1/2序列进行Blast搜索,结果搜索到3条序列,其中2条序列为黄艾美耳球虫(JX406873,HM768883),相似性分别为99%和98%,第3条序列为梨形艾美球虫(HM768889),相似性85%。在黄艾美耳球虫河北株ITS1/2序列高变区设计种特异引物,与大型艾美耳球虫和肠艾美耳球虫无交叉反应。结论:初步建立了灵敏、特异的PCR方法鉴定黄艾美耳球虫。