【摘 要】
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染色体不稳定性(CIN)是肿瘤细胞的重要特征,在肿瘤发生过程中起重要作用.有丝分裂进程正常有序,对于维持染色体稳定性至关重要.实验室前期工作发现DNA-PKcs沉默细胞多倍
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京 100850
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染色体不稳定性(CIN)是肿瘤细胞的重要特征,在肿瘤发生过程中起重要作用.有丝分裂进程正常有序,对于维持染色体稳定性至关重要.实验室前期工作发现DNA-PKcs沉默细胞多倍体比率增加.有报道,CHK2蛋白参与有丝分裂调控.目的：研究DNA-PKcs在有丝分裂进程中的调节作用及对CHK2信号通路的影响.方法：利用DNA-PKcs沉默的细胞模型及特异抑制剂NU7026处理细胞,利用免疫荧光方法观察DNA-PKcs活性抑制细胞有丝分裂进程变化；利用Western blot方法检测CHK2激活形式(pT68)表达差异；流式检测细胞周期分布改变.结果：本研究发现DNA-PKcs沉默细胞出现有丝分裂期阻滞,免疫荧光发现DNA-PKcs沉默细胞出现有丝分裂中期阻滞,且纺锤体多极细胞增比率增加,NU7026作用得到类似结果.Westem blot实验发现有丝分裂期DNA-PKcs pS2056及CHK2 pT68水平升高,而沉默DNA-PKcs及NU7026处理均可显著抑制微管损伤药物nocodazole诱导的CHK2 pT68磷酸化水平升高.结论：DNA-PKcs参与了细胞有丝分裂进程调控,其功能缺失诱发细胞有丝分裂进程紊乱.DNA-PKcs调节有丝分裂进程的下游分子之一为CHK2蛋白.DNA-PKes调控CHK2蛋白的具体机制将是下一步工作的重点.
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