玻璃化冷冻乳鼠卵巢的遗传安全性及移植后发育和受精潜能研究

来源 :中华医学会第十次全国妇产科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zmjmengm1988
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  目的:探讨玻璃化冷冻乳鼠卵巢对卵母细胞母源印迹基因Snrpn的甲基化影响及冻融后移植对卵母细胞发育、受精潜能的影响。方法:将127只出生10天的乳鼠卵巢进行ED20和EG5.5/30两种玻璃化液的冻存处理,乳鼠卵巢标本随机分为新鲜组(n=48)、ED20液冻存组(n=41)和EG5.5/30液冻存组(n=38).酶解消化、收集冻融前后的GV期卵母细胞通过重亚硫酸盐DNA测序法(BSP)进行印迹基因Snrpn差异性甲基化区域(Snrpn-DMR)的甲基化状态分析.同时进行成年去势雌鼠的肾被膜下移植,术后15天,通过动情周期恢复、卵巢回收率和雌激素水平判断移植物在体发育情况;超排卵收集成熟卵母细胞用于体外受精和胚胎培养,比较各组受精率和囊胚形成率.结果:ED20液冻存组和EG5. 5/30液冻存组GV卵子Snrpn一DMR均保持较高的甲基化比例,和新鲜组比较均无显著性差异(P>0. 05),异体移植后,新鲜组和两玻璃化液冻存组受体均恢复了动情周期和内分泌功能。除两玻璃化液冻存移植组动情周期恢复时间显著迟于新鲜组外(P<0. 05),恢复动情周期的受体率,卵巢回收率及雌二醇水平与新鲜组无显著性差异(P> 0.05 );来自两玻璃化液冻存组超排的成熟卵子可以完成体外受精、胚胎分裂和囊胚形成,其受精率、囊胚形成率与新鲜组比较无显著性差异(P>0. OS)。两玻璃化液冻存组间亦无显著性差异(P > 0. 05)。结论:实验表明玻璃化冷冻未对Snrpn - DMR的甲基化状态产生不利影响,随后的异体移植,超排卵后体外受精,GV卵子可以恢复发育和受精潜能,产生正常的附植前胚胎。
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