【摘 要】
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目的 对中国法洛四联症(TOF)患儿心脏组织中类视黄酸受体alpha基因(RXRA)mRNA水平及蛋白表达水平进行检测，并利用亚硫酸氢钠测序法(BSP)从表观遗传学角度对表达水平的变化进行研究，探索TOF发生的可能分子生物学机制.方法 收集法洛四联症患儿在外科手术中切除的流出道心肌组织(N=30)和对照组心肌组织(N=10)(尸检获取，心脏解剖无异常)，分别应用Real-time PCR和免疫组化
【机 构】
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复旦大学附属儿科医院,201102 复旦大学上海医学院分子医学重点实验室,200032
【出 处】
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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议
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目的 对中国法洛四联症(TOF)患儿心脏组织中类视黄酸受体alpha基因(RXRA)mRNA水平及蛋白表达水平进行检测，并利用亚硫酸氢钠测序法(BSP)从表观遗传学角度对表达水平的变化进行研究，探索TOF发生的可能分子生物学机制.方法 收集法洛四联症患儿在外科手术中切除的流出道心肌组织(N=30)和对照组心肌组织(N=10)(尸检获取，心脏解剖无异常)，分别应用Real-time PCR和免疫组化检测法洛四联症患儿和健康对照组心肌组织中RXRA基因mRNA及蛋白表达水平；利用亚硫酸氢钠测序法(BSP)对RXRA启动子区(-1416至-1067共23个甲基化位点)甲基化水平进行测定；以PGL3-basic作为载体构建含有RXRA启动子区序列(-1416至-1067)的质粒(PGL3-basic-RXRA)，利用Luciferase的方法，验证该段启动子区序列对表达的影响，进行功能验证.以上结果均使用SPSS17.0统计软件进行统计分析.结果 Real-time PCR提示TOF病例组心肌组织中RXRA基因mRNA水平较正常对照组减低(p＜o.05).免疫组化结果也提示TOF病例组心肌组织中RXRA蛋白水平较正常对照组减低.BSP结果提示TOF病例组RXRA启动子区甲基化水平较正常对照组增高(p＜0.05).功能验证实验提示RXRA启动子区序列(-1416至-1067)具有启动转录的活性.结论 利用TFsearch预测网站，对启动子区序列进行分析，发现该段序列能够结合多个转录因子.该段序列甲基化水平增高可能通过影响转录因子结合而影响转录水平，降低心肌组织中RXRA蛋白的表达，影响心脏的发育，从而导致TOF的发生.
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