人毛囊间充质干细胞诱导为iPSCs的实验研究

来源 :第六届全国组织工程与再生医学大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:abmabc
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将人毛囊间充质干细胞(human hair follicle mesenchymal stem cells,hHF-MSCs)重编程为iPSCs(induced pluripotent stem cells,iPS),旨在为iPSCs的产生及应用提供一种更为安全、理想便捷的细胞源.通过拔取头发的方式分离培养并鉴定hHF-MSCs;利用分别携带有Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4的pLV-EF1α-CDNA-IRES-EGFP慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集病毒上清并进行滴度测定;联合携带有Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4四种慢病毒对hHF-MSCs进行感染,经25~30天的诱导培养后获得两个iPSCs系即hHF-MSC-derived iPSCs 10-1及20-1;对iPSCs进行多能性检测:检测其是否具有碱性磷酸酶的表达,是否具有与人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)相同的细胞表面标记,采用Realtime PCR检测其内源性多能性基因的表达是否上调以及外源导入的多能性基因是否发生下调,核型是否正常以及将iPSCs注射入NON-SCID小鼠体内能否形成畸胎瘤.研究表明,hHF-MSCs通过Yamanaka因子的导入能够被重编程去分化为iPS细胞。
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