流感嗜血杆菌外膜蛋白P6和PD的原核表达

来源 :中华医学会第十八次全国儿科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:parisjiang
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目的:原核表达并纯化流感嗜血杆菌外膜蛋白P6和PD,获高纯度的抗原用于抗体制备,为其MAP候选疫苗的研究作前期探索.方法:抽提流感嗜血杆菌标准株a,b,c,d,e,f和不定型菌株DNA,PCR扩增外膜蛋白P6和PD基因pal、glpQ,将其克隆至pMD-18T质粒,转化入E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒,酶切鉴定后序列分析.结果:;与GenBank中流感嗜血杆菌pal、glpQ基因比较,本实验所克隆的流感嗜血杆菌各型菌株pal、gpQ基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%、98.9%以上.在IPTG诱导下,所构建的原核表达系统E.coli BL21 DE3pET42a-pal、B L21 DE3pET42a-glpQ能有效表达rP6、rPD蛋白,该重组蛋白主要以可溶性形式存在.结论:流感嗜血杆菌各型菌株外膜蛋白P6和PD高度保守,本研究构建的原核表达系统能有效表达可溶性rP6、rPD蛋白.
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