【摘 要】
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[目的]为了实现海产品中的假单胞菌的快速定量,满足海产品鲜度及货架期预测的需要.[方法]本文用PMA结合实时荧光定量PCR (PMA-qPCR),建立了冷藏海产品中假单胞菌的快速检测方法.[结果]对于不同浓度的假单胞菌液,用3μg/mL PMA处理DNA样品并曝光15min,既不抑制活菌DNA的特异性扩增,又可完全抑制死菌DNA扩增；PMA-qPCR法的最低检出限为160CFU/mL.对大菱鲆等十
【机 构】
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大连工业大学学院,辽宁大连116034;国家海洋食品工程技术研究中心,大连116034
【出 处】
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2016年中国水产学会水产品加工与综合利用分会学术年会
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[目的]为了实现海产品中的假单胞菌的快速定量,满足海产品鲜度及货架期预测的需要.[方法]本文用PMA结合实时荧光定量PCR (PMA-qPCR),建立了冷藏海产品中假单胞菌的快速检测方法.[结果]对于不同浓度的假单胞菌液,用3μg/mL PMA处理DNA样品并曝光15min,既不抑制活菌DNA的特异性扩增,又可完全抑制死菌DNA扩增；PMA-qPCR法的最低检出限为160CFU/mL.对大菱鲆等十种海产品中假单胞菌进行了PMA-qPCR定量检测.结果 显示,与不用PMA预处理的对照组比较,加入PMA后,除了海虹和梭鱼,其他8种海产品的Ct值均明显升高,提示这8种海产品中的死菌含量较高.而不用PMA预处理则将死菌和活菌的DNA同时检出,导致假单胞菌定量结果严重偏大.利用假单胞菌CFC选择性培养基,采用平皿菌落计数法对上述海产品中假单胞菌进行定量检测,结果与PMA-qPCR结果非常接近.但是,平皿菌落计数法需要培养48h后才能获得结果,而PMA-qPCR法只需4-5h.[结论]PMA-qPCR法不能能够克服死亡菌体对结果的干扰,更能满足海产品生产及销售环节及相关科学研究中假单胞菌快速定量的要求.
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